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信号转导和转录激活因子(signal transducers and activators of transcription,STAT)介导的信号途径,在细胞因子介导的多种生理及病理过程中起着重要作用。近年来,STAT蛋白在多种肿瘤中均被发现,其中,STAT3与肿瘤的关系尤为密切,被认为是一种原癌基因。细胞信号负调控因子家族(suppressors of cytokine signaling,SOCS)是1997年以来被发现的STAT信号通路的负调控因子。SOCS家族包括CIS和SOCS1～7共8个成员,目前对SOCS3基因了解的较为清楚,其启动子上含有STAT3的结合位点,活化的STAT3可作为核转录因子诱导SOCS3基因的表达,其表达产物通过抑制STAT3蛋白的活性,从而维持细胞的正常生长。已证实肺癌组织存在STAT3蛋白的持续激活,但关于SOCS3基因在肺癌组织中的表达及作用机制尚未见报道。 本研究通过观察细胞因子信号负调控因子SOCS3和STAT3基因在人肺癌组织中的表达状况,并将SOCS3基因真核表达载体转染A549细胞内,检测转染前后细胞增殖及原癌基因的表达变化,以探讨SOCS3基因对肺腺癌细胞株A549中STAT3介导的信号通路及细胞增殖的调控机制,将有可能为肿瘤的基因治疗提供一个新的靶点。 研究内容: 1、RT-PCR检测肺癌组织和正常肺组织中SOCS3、STAT3 mRNA表达。 2、应用lipofectmine2000将SOCS3表达载体和筛选载体转染入A549中,G418筛选。RT-PCR、免疫细胞化学法分析SOCS3表达变化。 3、半定量RT-PCR和Western blot检测转染前后细胞STAT3 mRNA表达和STAT3蛋白活性变化。 4、流式细胞仪、~3H-TdR掺入实验、MTT检测转染前后细胞增殖变化。 5、半定量RT-PCR检测细胞癌基因c-Myc、c-Fos、c-Jun mRNA表达变化。 结果: 1、RT-PCR未检测到肺癌组织和正常肺组织中SOCS3 mRNA表达;肺癌组织中STAT3 mRNA表达显著高于正常肺组织。 2、共转染细胞经G418(500 μg/ml)筛选后获得阳性细胞克隆:RT-PCR和免疫细