马齿苋多糖的羧甲基修饰及抗肿瘤活性的研究

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随着经济高速发展和工业化进程的加速,生活方式的改变、环境污染以及遗传等方面的因素的影响,我国癌症的发病率正呈快速上升的趋势,成为严重危害人民生命健康的疾病。在非传染性的疾病中,癌症是导致人类死亡的第二大致死元凶。2018年,全世界新增1,810万人罹患癌症,有960万人死于癌症。在中国,2018年新增癌症病人430万人,而这一数字在2040年预计将超过500万人甚至更高。目前,恶性肿瘤的治疗方法主要有手术治疗和放化疗等方法。由于手术治疗的局限性和放化疗治疗的毒副作用,给患者的身心健康造成难以挽回的损害,同时由于部分药物高额的费用,给患者本人及国家带来了经济负担。因此,从天然植物药材中寻找并研发新的高效廉价抗肿瘤药物,已成为近年来医药领域的重要研究方向。马齿苋(Portulaca oleracea L.)亦被称为五行草、长命菜、五行菜等,为马齿苋科(Portulacease)马齿苋属(Portulaca),是我国传统的药食两用植物。马齿苋多糖(polysaccharides from Portulaca oleracea L.,POPs)是其主要的有效成分之一,已被研究证明具有抗氧化、降血糖、抗肿瘤等方面的功效。但是国内外学者的研究发现,天然多糖较难溶于水,限制了其生物活性的发挥。通过硫酸化、磷酸化、乙酰化、羧甲基化等结构修饰后,可改善其理化性状,提高其生物活性。chen等的研究显示,硫酸化马齿苋多糖对Hep G2细胞和Hela细胞的抑制率明显高于未修饰多糖。然而,对马齿苋多糖的羧甲基化修饰及其生物活性的研究尚未见相关报道。为此,本研究在课题组前期分离提取以及纯化马齿苋多糖的基础上,对其进行羧甲基修饰,比较研究马齿苋多糖修饰前后的抗氧化活性及抗肿瘤活性。研究结果如下:1.提取纯化马齿苋多糖,用异丙醇-氯乙酸反应体系对马齿苋多糖进行羧甲基修饰,并通过单因素实验以及响应曲面法优化羧甲基马齿苋多糖的修饰工艺。获得到羧甲基马齿苋多糖(carboxymethyl polysaccharides from Portulaca oleracea L.,CM-POP)的最佳修饰条件为:MCA2.5 g,反应时间3.7 h,反应温度65.5℃,氢氧化钠浓度为6.26 mol/L。2.马齿苋多糖及羧甲基马齿苋多糖的抗氧化活性研究。以维生素C(vitamin C,Vc)为参比,检测了POP以及CM-POP对DPPH、·OH、·O2-自由基的清除率。结果显示,羧甲基修饰前后的马齿苋多糖均具有一定的抗氧化活性,随着浓度的升高,Vc和多糖的抗氧化活性均有增强,在溶液浓度为0-5.0 mg/m L范围内,Vc对三种自由基的清除作用最强。羧甲基修饰并未提升马齿苋多糖对DPPH自由基的清除能力,而在对·OH自由基和·O2-自由基的清除能力上羧甲基修饰后的马齿苋多糖CM-POP有较显著的提高,但相对于Vc对自由基的清除能力而言这种提升是有限度的。3.马齿苋多糖及羧甲基马齿苋多糖的抗肿瘤活性研究。对比研究POP以及CM-POP对Hep G2、A549癌细胞的清除率及其相关机制。结果显示羧甲基马齿苋多糖对Hep G2肝癌细胞有一定的抑制作用,对A549肺癌细胞的增殖却没有显著的抑制作用。
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