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卵泡发育主要是卵泡颗粒细胞(GCs)和内膜细胞(TCs)增殖的结果,卵泡颗粒细胞和内膜细胞的增殖主要依赖于雌二醇(E2)和促卵泡素(FSH)的共同作用。水牛的繁殖率低,超数排卵效果一直很不理想。为提高水牛的超数排卵效果,本研究探讨了E2和FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响,以便为建立水牛超数排卵的技术方法奠定理论依据。研究取得结果如下:1.不同浓度FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响采用FSH(0、2、8、14、20、26μg/mL)处理水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞24 h后,检测细胞的增殖情况,结果显示:14、20、26 μg/mL组的细胞增殖水平显著高于对照组、2μg/mL和8μg/mL组(p<0.05),而14、20、26μg/mL三组间无显著差异(p>0.05)。2.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响不同浓度的E2(0、0.5、1、2、4ng/mL)联合FSH(14μg/mL)分别处理水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞24h,E2=0ng/mL、FSH=00μg/mL为对照组,检测细胞的增殖情况,结果发现:E2(1 ng/mL)+FSH组的颗粒细胞增殖水平显著高于对照组、FSH(14 μg/mL)单独处理组和E2(0.5 ng/mL)+FSH组(p<0.05);而E2(1 ng/mL)+FSH组的内膜细胞增殖水平显著高于其余各组(p<0.05)。因此,以下所有试验主要以E2=0ng/mL、FSH=0 μg/mL为对照组,分别对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞进行FSH(14μg/mL)单独处理和E2(1 ng/mL)+FSH(14 μg/mL)联合处理。3.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡的影响24小时后,检测细胞凋亡情况,结果显示:E2+FSH联合处理组的细胞死亡率和早期凋亡率显著低于FSH单独处理组和对照组(p<0.05),而存活率显著高于FSH单独处理组和对照组(p<0.05)。4.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞受体基因表达的影响24小时后,检测受体基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组细胞中FSHR、LHR的mRNA表达量显著高于对照组和FSH单独处理组;而颗粒细胞中ER-β的mRNA表达量显著低于对照组(p<0.05),但与FSH单独处理组无显著差异(p>0.05);内膜细胞中ER-β的mRNA表达量显著低于对照组和FSH单独处理组(p<0.05)。5.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖基因表达的影响24小时后,检测细胞增殖基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组细胞中PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2的mRNA表达量显著高于对照组和FSH单独处理组(p<0.05)。6.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡基因表达的影响24小时后,检测凋亡基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞中Bcl-2的mRNA表达量显著高于对照组和FSH单独处理组,且Bax、Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达量显著低于对照组(p<0.05)。以上结果表明,FSH(14 μg/mL)或E2(1 ng/mL)+FSH(14 μg/mL)联合作用均能够促进水牛GC和TC的增殖,并抑制细胞凋亡,但E2+FSH联合作用的效果优于FSH单独处理。E2+FSH的联合作用可能是通过提高激素受体FSHR、LHR mRNA的表达,抑制ER-β mRNA的表达,提高了水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞对FSH和LH的应答能力,从而促进增殖基因PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和凋亡抑制基因Bcl-2的表达,抑制促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达,最终促进水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖,且抑制细胞的凋亡。因此,在应用FSH对水牛进行超数排卵处理时,注射E2将有望提高水牛的超数排卵效果。