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鸡新城疫(Newcastle disease，ND)是由鸡新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的，对养禽业危害非常严重的一种急性传染病，其主要特征是引起禽类消化系统的紊乱、中枢神经的损伤，临床表现主要为高热、呼吸困难、食欲减退、下痢以及运动失调等。在全球范围内，鸡新城疫是危害养禽业健康发展的禽类的A类传染病。我国自1948年报道鸡新城疫以来，它对我国养禽业已经造成了巨大的经济损失。因此，加强对鸡新城疫的诊断、检测、预防以及治疗技术的研发就愈发重要。 HI试验作为鸡新城疫的传统血清学诊断的主要方法，使用抗鸡NDV血清来鉴定病毒，但是抗NDV血清只有一种血清型，不能区分NDV的不同致病型毒株;而且抗NDV血清还与有些禽副黏病毒存在交叉反应，不能准确的鉴定出NDV病毒。但是，鸡新城疫的单抗可以识别不同致病型的特定抗原位点，而且具有高度的特异性，使用单克隆抗体的检测技术克服了传统血清学检测中的这些问题，被广泛的应用到鸡新城疫诊断、检测、预防的各个方面。 本研究中，为了获得产物更为丰富的抗鸡新城疫病毒的单克隆抗体，采用新城疫的全病毒(NDV HN09-68)作为免疫原来制备单克隆抗体。NDV HN09-68的平均死亡时间(MDT)和脑内致病性指数(ICPI)分别为53h和1.75，符合强毒特征，因此使用HN09-68作为免疫原。将病毒浓缩纯化后，免疫6周龄的BALB/c雌鼠，测定小鼠抗体水平超过1∶102400，取脾细胞和NS0细胞融合，使用全病毒包被的ELISA方法进行筛选，把阳性孔经过3次有限稀释亚克隆后，最终得到7株抗NDV的单克隆抗体，分别命名为2C9、3B6、3F6、12D4、13A2、13B11、15H7。ELISA试验和HI试验检测结果表明:这些单克隆抗体可与NDV09-68株病毒特异性结合，而不与新城疫的其他毒株:强毒F48E9株、弱毒LaSota株反应。亚型鉴定试验表明:13A2为IgG1亚型，其它6株为IgM亚型。 为进一步分析所制备的7株单克隆抗体的特异性，利用原核表达系统表达HN09-68的蛋白用于单克隆抗体特异性的鉴定。考虑到新城疫病毒的血凝素神经氨酸酶(HN蛋白)构成了病毒囊膜表面的大纤突，是病毒非常重要的致病相关性蛋白，介导NDV对细胞受体的识别与洗脱，是免疫应答中重要的宿主保护性抗原，针对HN蛋白的单抗隆抗体有可能对宿主起到保护作用。因此，筛选针对HN蛋白的单克隆抗体将十分有意义。 选取HN蛋白的主要抗原区域，对该基因进行扩增，并与pET-32a连接，构建pET-32a-HN表达载体，再转入大肠杆菌BL21中进行诱导表达，表达出的融合蛋白大小约为37.1 KDa，主要存在于包涵体中，纯化复性后包被ELISA反应板，与单抗2C9、3B6、12D4均呈阳性反应。表明这3株单抗特异性针对HN蛋白，也证明复性后的HN蛋白具有天然活性。由于2C9对NDV HN09-68株的HI效价较高，因此选择2C9进行鸡胚中和试验。结果表明，2C9具有中和病毒作用，2C9单抗可能具有重大的临床应用价值。