七氟醚预先吸入诱导HO-1表达对急性肺损伤大鼠肺内炎症反应的影响

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第一部分不同浓度七氟醚预先吸入对ALI大鼠炎症反应的影响目的:采用不同浓度七氟醚预先吸入LPS诱导的急性肺损伤大鼠,观察其对肺脏的ICAM-1和CINC-1 mRNA及其蛋白表达的影响。方法:48只雄性SD大鼠,腹腔注射20%乌拉坦1g/kg麻醉,气管切开插管行机械通气30min后,随机分成6组(每组8只):(1)对照组(A组);(2)单纯七氟醚吸入组(B组);(3)1.5MAC七氟醚+LPS组(C组);(4)1.0MAC七氟醚+LPS组(D组);(5)0.5MAC七氟醚+LPS组(E组);(6)内毒素组(F组)。F组机械通气30min后经股静脉注射LPS 5mg/kg;A组机械通气30min后予股静脉注射等量生理盐水;B组吸入1.5 MAC七氟醚30min后予股静脉注射等量生理盐水,C、D、E组于股静脉注射LPS 5mg/kg前分别吸入1.5、1.0、0.5MAC七氟醚30min。直接动脉测压监测MAP,记录并监测基础状态T0(吸七氟醚前即刻)、实验30min(吸七氟醚后即刻)T1、150min(给LPS后2h)T2、390min(给LPS后6h)T3四个时点MAP、动脉血气,6h后放血活杀大鼠,取肺组织分别测湿干重比(W/D)、HE染色行肺组织病理学评分;检测肺组织匀浆MPO活性;免疫印记(Western blotting)法检测肺组织ICAM-1、CINC-1蛋白的表达,RT-PCR法检测CINC-1、ICAM-1 mRNA的表达。结果:(1)与A组比较:注射LPS各组(C、D、E、F组)肺组织W/D值均呈现不同程度增加(P<0.05);组织病理形态学积分亦明显增高(P<0.05)。与F组比较:C、E组W/D值差异无显著性(P>0.05),D组W/D值下降明显(P<0.05);C、D、E三组病理形态学积分明显减少(P<0.05),且D组下降最明显。单纯七氟醚吸入未引起明显肺脏病理形态学改变(P>0.05);(2)与A组比较:注射LPS各组(C、D、E、F组)肺组织MPO活性升高,肺组织ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表达明显增加(P<0.05);但七氟醚预先吸入组(C、D、E组)MPO活性和ICAM-1mRNA、CINC-1mRNA及其蛋白表达比F组低(P<0.05),且以C、D组明显,但C、D两组比较无差异(P>0.05),C、D两组与E组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)单纯1.5MAC七氟醚吸入对肺组织MPO活性、ICAM-1、CINC-1mRNA及蛋白表达均无明显影响,与A组比较无差异(P>0.05)。结论:(1)股静脉注射LPS 5mg/kg可成功复制ALI大鼠模型;(2)不同浓度七氟醚预先吸入均能不同程度减轻LPS所致ALI肺部炎症反应,其中以1.0MAC七氟醚为较适宜的吸入浓度。第二部分七氟醚预先吸入对ALI大鼠肺组织HO-1表达的影响目的:采用1.0MAC七氟醚预先吸入LPS诱导的ALI大鼠,观察HO-1在肺组织中的表达和意义。方法:48只雄性SD大鼠,腹腔注射20%乌拉坦1g/kg麻醉,气管切开插管行机械通气并维持至处死大鼠。机械通气20min后,大鼠随机分成6组(每组8只):(1)对照组(A组);(2)ZnPP预处理组(B组);(3)单纯1.0MAC七氟醚预先吸入组(C组);(4)1.0MAC七氟醚+LPS组(D组);(5)ZnPP+1.0MAC七氟醚+LPS组(E组);(6)LPS组(F组)。分组后B、E组股静脉注入ZnPP(10mg/kg,10g·L-1),其余各组分别注入1ml/kg等体积生理盐水。10min后,C、D、E三组分别吸入1.0MAC七氟醚30min,D、E、F经股静脉注入LPS5 mg/kg,其余各组注射等体积生理盐水。6h后放血处死大鼠,留取肺组织标本,分别测湿干重比(W/D)、HE染色行肺组织病理学评分;检测肺组织MPO和HO-1活性;免疫印迹(Western blotting)法检测肺组织ICAM-1、CINC-1、HO-1蛋白的表达,RT-PCR法检测CINC-1、ICAM-1和HO-1mRNA的表达。结果:(1)单纯ZnPP预处理组(B组)、单纯七氟醚吸入组(C组)对肺组织W/D、病理学积分、MPO和HO-1活性、CINC-1、ICAM-1和HO-1的表达均没有明显影响,与对照组(A组)比较,差异均没有统计学意义(P>0.05);(2)与A组比较:注射LPS各组(D、E、F组)肺组织W/D均增加(P<0.05);肺组织病理形态学积分均明显增高(P<0.05)。D组损伤较E、F组轻(P<0.05);(3)与A组比较:注射LPS各组(D、E、F组)肺组织匀浆MPO活性升高,ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表达明显增加(P<0.05)。七氟醚预先吸入组(D组)MPO活性、ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表达均比E、F组低(P<0.05):E组高于F组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)注射LPS后F组HO-1活性、HO-1mRNA及其蛋白表达增加,与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05);而D组HO-1活性、HO-1mRNA及其蛋白表达较F组进一步增加(P<0.05);E组HO-1活性、HO-1mRNA及其蛋白表达较D组和F组均低(P<0.05)。结论:(1)肺组织HO-1的表达对ALI具有保护作用;(2)上调HO-1表达是七氟醚抑制ALI肺内炎症反应的作用机制之一;(3)HO-1特异性抑制剂ZnPP可消除七氟醚对ALI肺内炎症反应的抑制作用。
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