【摘 要】
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目的：研究NVP-BEZ235通过PI3K/Akt信号通路体外抑制血管生成和促进胰腺癌细胞凋亡的作用及分子机制，为胰腺癌的生物学治疗提供可能的分子靶点及抑制剂。 材料与方法：体外培养
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目的：研究NVP-BEZ235通过PI3K/Akt信号通路体外抑制血管生成和促进胰腺癌细胞凋亡的作用及分子机制，为胰腺癌的生物学治疗提供可能的分子靶点及抑制剂。 材料与方法：体外培养胰腺癌 Panc-1细胞，首先，应用 MTT法检测PI3K/AKT的选择性抑制剂NVP-BEZ235对Panc-1细胞的抑制作用，并应用倒置显微镜观察加药前后（0h、48h）Panc-1细胞的形态学变化，并利用平板克隆形成实验验证 NVP-BEZ235处理前后 Panc-1细胞的增殖情况；其次，采用Western blotting方法、免疫荧光法检测NVP-BEZ235处理前后血管生成相关因子VEGF蛋白的表达情况。此外，利用Hoechst33342染色法、Western blotting方法，检测NVP-BEZ235处理前后Panc-1细胞的凋亡情况及caspase-3，caspase-8和PARP等蛋白的表达情况。 结果：1. NVP-BEZ235可抑制Panc-1细胞的增殖。倒置显微镜观察发现，未经处理的Panc-1细胞体外生长连接紧密，死亡细胞很少；而应用NVP-BEZ235处理组的Panc-1细胞间连接松散呈梭形，死亡细胞较多。MTT检测结果表明，NVP-BEZ235可浓度依赖性地抑制 Panc-1细胞的体外增殖，且在浓度250nM处理48h时显著地杀伤约50％的Panc-1细胞；平板克隆实验也证明：随着NVP-BEZ235药物处理浓度的升高，Panc-1细胞体外克隆形成率逐渐降低。2. NVP-BEZ235可通过VEGF体外抑制Panc-1细胞的血管生成。Western blotting结果显示，血管生成相关因子VEGF蛋白的表达量随着药物浓度的升高而降低；免疫荧光结果与其结果一致。3. NVP-BEZ235可通过激活caspase-3/8和 PARP来诱导Panc-1细胞凋亡。由Hoechst33342染色方法可以看出，未经药物处理的细胞，核膜完整，细胞核呈蓝色。而经NVP-BEZ235药物处理48h后，细胞核呈亮蓝色、碎片状边集呈分叶状。Western blotting结果显示，经NVP-BEZ235处理后，Caspase-3、Caspase-8和PARP出现裂解条带，且随NVP-BEZ235浓度的升高而表达增强，说明NVP-BEZ235可通过Caspase-3、Caspase-8以及PARP体外诱导Panc-1细胞的凋亡。 结论： 1. NVP-BEZ235可有效抑制体外胰腺癌Panc-1细胞的增殖。 2. NVP-BEZ235可能通过下调VEGF的表达来抑制Panc-1细胞血管形成。 3. NVP-BEZ235可能通过激活Caspase-3/8和PARP的表达来诱导Panc-1细胞凋亡。
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