论文部分内容阅读
百合是全球重要的鲜切花和盆栽花花卉植物。百合的高度杂合性和自交不亲和是阻碍传统育种的两个主要因素。组培技术为百合的遗传改良提供了新的途径。植物再生是组培技术育种的前提条件。与器官发生比较,体细胞胚发生具有再生效率高、嵌合体少等多种优点。本研究旨在建立百合简易、高效、广谱的体细胞胚发生体系,并应用ISSR分子标记技术鉴定再生植株的遗传稳定性。本研究以麝香百合与东方百合的杂交品种“双色百合”(Lilium longiflorum×Orientalhybrid “Triumphator”)试管鳞茎为材料,通过优化鳞茎薄层诱导胚性愈伤组织形成及增殖的最佳激素组合,成功的建立了百合鳞茎薄层诱导胚性愈伤组织体系。该体系的技术要点如下:从4周龄的试管鳞茎基部进行横切,取0.8mm薄层组织,接种在含有0.1mgL-1NAA和0.1mg L-1KT的MS (Murashige and Skoog,1962)培养基上,暗培养6周后,外植体表面形成浅黄色、颗粒状、易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在含有1.0mg L-1NAA+0.2mg L-1TDZ的培养基上增殖效率最佳。胚性愈伤组织在不含激素的MS培养基能正常形成无性胚并萌发成完整植株。利用ISSR分子标记技术,对再生植株进行遗传稳定性鉴定。从40个引物中筛选出8个引物,每个引物都能获得至少4条带,8个引物扩增出片段大小介于250~1200bp的47条带,30株共扩增出1410条带,均未发现特异性条带。将建立的诱导胚性愈伤组织体系应用到其它4个不同主栽百合品种,胚性愈伤组织诱导最高为85.0%(麝香百合),最低为25.0%(兰州百合),平均值为51.3%。简易、广谱的百合无性胚发生体系的建立,为百合快繁、转基因、人工种子生产、超低温保存等提供了技术平台。