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目的探讨mi R-499对缺氧/复氧所诱导的原代心肌细胞凋亡的影响,初步讨论其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路之间的关系,为临床上预防或治疗缺血再灌注损伤的发生提供治疗靶点。方法通过对新生大鼠原代心肌细胞进行缺氧3h/复氧4h,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;将心肌细胞随机分为4组:正常对照组(Control组)、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧/复氧+mi R-499激动剂agomir预处理组(Agomir组)、缺氧/复氧+mi R-499激动剂agomir+PI3K特异性阻断剂LY294002组(Agomir+LY294002组)。采用MTT方法检测实验各组心肌细胞活力,western blot检测实验各组Caspase-3表达量、PI3K及磷酸化PI3K(p-PI3K)表达量、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)表达量,荧光定量RT-PCR方法检测实验各组mi R-499及PI3K m RNA的相对表达量。结果1.各组心肌细胞活力的比较与Control组(90.24±4.77)相比,A/R组心肌细胞活力(41.27±1.56)降低(P<0.05);与A/R组相比,Agomir组心肌细胞活力(77.38±2.65)增加(P<0.05)。2.各组心肌细胞PI3K m RNA及mi R-499相对表达量的比较与Control组相比,A/R组PI3K m RNA及mi R-499表达量下降(P<0.05),差异有统计学意义;与A/R组相比,Agomir组PI3K m RNA及mi R-499表达量增加(P<0.05),差异有统计学意义。3.各组心肌细胞中Caspase-3表达量的比较与Control组相比,A/R组 caspase-3表达量明显增多(P<0.05),差异有统计学意义;与A/R组相比,Agomir组caspase-3表达量明显减少(P<0.05),差异有统计学意义;与Agomir组相比,Agomir+LY294002组caspase-3表达量增加(P<0.05),差异有统计学意义。4.PI3K/Akt信号通路表达水平的比较与Control组相比,A/R组p-PI3K、p-Akt表达量减少(P<0.05),差异有统计学意义;与A/R组相比,Agomir组p-PI3K、p-Akt表达量明显增加(P<0.05),差异有统计学意义;与Agomir组相比,Agomir+LY294002组p-PI3K、p-Akt表达量减少(P<0.05),差异有统计学意义。结论1.mi R-499在缺氧状态下其表达量下降;2.增加mi R-499的表达量可减少缺氧/复氧所诱导的心肌细胞的凋亡;3.mi R-499的心肌细胞保护作用可能与其活化PI3K/Akt信号通路有关。