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马兜铃酸是硝基菲酸类成分,广泛存在于马兜铃科(Aristolochiaceae)马兜铃属(Aristolochia)植物中。因混用/误用而服用关木通引发了国际焦点——马兜铃酸肾病(AristolochicAcidNephropathy,AAN),美国食品药品监督管理局首先提出禁止或限制含马兜铃酸及其易混药材的进口,各国也纷纷效仿,给中医药带来了严重的影响;进而还制定了相应的限量标准,如英国起草的200ng?g-1标准,在各方的强烈质疑下,执行了1μg?g-1的标准。为维护中医药的声誉,掌握中药标准的自主制定权,我们在《中国药典》2010版的细辛项下首次提出了适宜于中药特点的10μg?g-1马兜铃酸A(AristolochicAcidA,AA)的标准。 为建立限量标准,我们以含马兜铃酸药材、可能混淆的或出口受限的中药品种及其中成药为研究对象,在系统考察和确定样品提取方法的基础上,采用HPLC技术,建立了10μg?g-1马兜铃酸A的限量检测方法,并为1μg?g-1限量检测奠定了基础,为含马兜铃酸A的中药安全使用提供实用、快速、准确的检测手段。 本论文以极微量马兜铃酸A为研究对象,围绕“变微量成分测定为常量分析”的设计开展研究,建立适宜于复杂样本中微量成分分析鉴别的新模式,为临床用药的安全,市场流通和出口保障提供快捷、低成本、易操作质量分析方法。具体研究内容如下: 1.供试样制备方法采用阴性药材(木通)与定量加入待测成分(马兜铃酸A)作为供试品溶液,对样品提取溶液的pH值,提取方式,萃取溶剂等,以正交试验的方法,优选、验证并确定了制备方法:0.01mol?L-1NaHCO3溶液40倍量超声提取,调溶液pH值3.0,氯仿萃取4次,合并萃取液,蒸干,甲醇少量多次溶解,微孔滤膜滤过,取续滤液即得。 2.10μg?g-1马兜铃酸A限量检测方法学研究按照中药质量标准建立的方法学考察的技术要求进行了方法的建立,特别针对分析方法的最低检测限、最小取样量和回收率进行优化。结果表明:马兜铃酸A在0.016～0.51μg范围内线性关系良好,r=0.9993,LOD为4ng,平均加样回收率为101.2％。 3.10μg?g-1马兜铃酸A限量检测法的应用采用建立的标准限量检测法,对11批市售细辛药材和15批中成药样品中马兜铃酸A的含量进行了分析,结果表明:11批细辛中马兜铃酸A的含量在3.1～26.6μg?g-1范围内,其中只有3批符合ChP2010细辛药材项下的限量要求;15批中成药样品中只有1批检出了马兜铃酸A。 本方法简单、合理、普适性强,能够准确地对含马兜铃酸药材、可能混淆的或出口受限的中药品种及其中成药进行定性定量测定,对于临床用药的安全,市场流通和出口的保障具有重要意义。