目的：肝纤维化是一个细胞外基质沉积和降解失衡的病理过程；活化的肝星状细胞(HSC)能分泌各种细胞因子如转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等，通过旁分泌和自分泌的形式进一步激活HSC，活化的HSC具有了收缩、增殖和分泌大量的细胞外基质(ECM)包括胶原，层粘连蛋白、蛋白聚糖等的功能；与此同时，分泌的能降解ECM的基质金属蛋白酶(MMPs)减少，而其抑制剂(TIMPs)增多，因此，HSC成为肝纤维化的中心环节。纤维化是可以逆转的。那么如何逆转肝纤维化成为我们迫切要解决的问题。越来越多的研究表明：通过凋亡形式清除活化的HSC是逆转肝纤维化的关键。诱导凋亡的途径很多：如基质金属蛋白酶9(MMP-9)，I型胶原的降解均可诱导HSC凋亡。因此，我们设想：如果MMPs增多，TIMP-1减少，胶原降解，一则可以促进HSC凋亡；二则也可以降解多余的ECM，减轻纤维化程度。所以研究HSC凋亡后ECM是如何代谢的成为该设想的前提条件。 方法：含10％胎牛血清的DMEM培养HSC-T6，传代后换无血清培养基继续培养。分成对照组和模型组：对照组，N1：即正常HSC-T6，8小时后收获；N2：正常HSC-T6，24小时收获；N3：正常HSC-T6培养8小时后，更换新鲜的DMEM培养基，24小时收获细胞。模型组，M1：加入浓度为100nmol/LH2O2，8小时收获细胞；M2：加入浓度为100nmol/LH2O2，24小时收获细胞；M3：加入浓度为100nmol/LH2O2，8小时后更换新鲜的DMEM培养基，24小时收获细胞。利用Anexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测HSC凋亡。检测不同凋亡程度时TIMPs、MMPs、及胶原的改变。在实验中，我们选取了3组不同凋亡水平的细胞(5％、58％、71％，编号为A、B、C)；利用半定量RT-PCR测定TIMP-1、TIMP-2、MMP-2、MMP-9、COL I、COLⅢ在mRNA水平的表达，利用western检测细胞内TIMP-1蛋白量的表达，利用明胶酶谱分析MMP-2、MMP-9在细胞内和细胞外的蛋白水平表达。 结果：三个对照组收获细胞的凋亡率分别是5.56％、13.75％、12.58％；三个模型组的凋亡率分别是35.78％、；71.98％、57.55％。 对不同凋亡程度时，TIMPs、MMPs、及胶原改变的研究表明：TIMP-1的含量B＞A＞C；TIMP-2 A≈B＞C；MMP-2B≈C＞A；MMP9 B≈C＞A；COL I A＞B＞C；COLⅢ A＞B＞C；且COL Ⅰ的变化梯度＞COLⅢ； 讨论:在HSC-T6自然凋亡过程中，N1与N2组，N1与N3组凋亡率的差别均有统计学意义；但N2与N3凋亡率的差别无统计学意义；因此我们推断：HSC-T6在培养过程中，凋亡率随着时间增加而增加，而更换新鲜培养基(减少ECM、TIMPs、MMPs对HSC的影响)对凋亡无影响。 加入H2O2诱导HSC-T6凋亡后，M1、M2、M3三组凋亡率的差别两两比较均有统计学意义。即更换新鲜培养基(减少ECM、TIMPs、MMPs对HSC的影响)能抑制H2O2诱导的HSC凋亡。对于此现象，我们有三个可能推断：第一：MMPs诱导HSC凋亡的能力大于TIMPs抑制凋亡的能力；第二：MMPs的绝对数量大于TIMPs；第三：其他因素的影响如COL Ⅰ降解促进凋亡等。 结论：ECM、TIMPs、MMPs的改变对H2O2诱导的HSC凋亡有影响。对不同凋亡水平时ECM的代谢变化研究表明：凋亡早期：TIMP-1上升明显，COLⅠ COLⅢ高表达，MMP-2、MMP-9相对较少，而且随着HSC凋亡数量增加又反过来刺激TIMP-1的升高；进而抑制MMP-2、MMP-9的分泌以及胶原的降解，此时HSC抗凋亡能力较强。凋亡晚期：TIMP-1、COLⅠ、COLⅢ的表达也急剧减少，而MMP-2、MMP-9表达增高，因此在凋亡后期促凋亡能力大大增加。TIMP-2整个过程中的表达较低，改变不明显。 综上所述，我们看出胶原、MMPs、TIMP-1在整个凋亡过程中起着重要的作用。