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背景与目的Livin是与肿瘤发生发展密切相关的凋亡抑制蛋白家族(inhibitorofapoposisproteins,IAps)中的新成员,能够与内源IAP抑制剂SMAC和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族成员caspase-3,caspase-7,caspase-9结合,发挥抗细胞凋亡的作用。它特异性高表达于多种实体肿瘤组织,影响肿瘤细胞的生长,使肿瘤细胞对放化疗耐受。有研究表明,Livin基因在人胰腺癌组织中高表达,而在胰腺癌癌旁组织中低表达或不表达。RNA干扰(RNAi)能高效特异地调低基因表达,已广泛应用于肿瘤治疗的研究。本研究旨在采用RNA干扰技术转染胰腺癌PANC1细胞,观察其对人胰腺癌细胞PANC1增值凋亡的影响,探讨livin基因在胰腺癌中的作用,为进一步研究胰腺癌的基因治疗奠定基础。方法①设计并体外化学合成针对livin基因的小干扰RNA序列,以脂质体(lipofectamineTM2000)为载体转染具有高侵袭潜能低分化人胰腺癌细胞株PANC1,流式细胞仪检测转染效率,确定PANC1细胞最佳转染条件,采用RT-PCR法测定转染后PANC1细胞Livin及内参GAPDH的mRNA表达,测定干扰效率,以筛选出最有效干扰序列。②用最有效序列靶向沉默对数生长期PANC1细胞基因表达,分别检测不同时间段检测livin mRNA表达水平的变化,并用RT-PCR法和紫外分光光度法检测转染后不同时间段Caspase-3的mRNA及蛋白水平变化。MTT法检测不同时间段细胞增殖活性变化,绘制生长曲线。③流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测转染livin-siRNA后不同时间段PANC1的凋亡率。结果①细胞数约为每孔2.0×105个、siRNA浓度约为80nmol/L,Lipofectamine2000与siRNA比例为2:4(24孔板)时,有较佳的转染效率,继续提高siRNA浓度并不能明显提高转染效率;②Livin-siRNA3转染PANC1细胞后livin mRNA表达降低最为显著,显示出最佳的干扰效率;干扰效率能够至少维持至转染后的72h;③转染了Livin-siRNA3后PANC1细胞Caspase-3无论在mRNA水平还是蛋白水平表达均增高,转染了Livin-siRNA3的PANC1细胞细胞增殖能力下降,凋亡增加,Livin基因沉默与Caspase-3蛋白酶活性呈明显负相关结论Livin-siRNA能有效沉默PANC1细胞Livin基因表达,抑制PANC1细胞增殖,显著诱导胰腺癌PANC1细胞凋亡, Livin基因通过Caspase蛋白酶水解途径调控PANC1细胞生长。靶向RNAi干扰技术在胰腺癌的基因治疗中具有潜在价值,Livin可以作为潜在的胰腺癌基因治疗靶点。