目的:　　 研究掌叶半夏总蛋白单独或联合化疗药物顺铂对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖、凋亡作用,以探讨掌叶半夏总蛋白是否具有抗卵巢癌特性,以期为卵巢癌的中西医结合治疗提供实验依据。　　 方法:　　 1.掌叶半夏总蛋白的提取及鉴定。　　 2.体外培养卵巢癌SKOV3细胞,3.用不同浓度的掌叶半夏总蛋白(0.8,4,20,100,200,400μg/ml)以及不同浓度的顺铂(0.1,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0μg/ml)进行干预,设立空白组,应用细胞活性计数方法(Cell Counting Kit-8,CCK-8法)检测不同浓度掌叶半夏总蛋白及顺铂单独或联合作用不同时间(48小时、72小时)对卵巢癌SKOV3细胞体外生长的影响,计算抑制率。　　 4.流式细胞仪测定不同浓度的掌叶半夏总蛋白(20,50,100,200,400μg/ml)及不同浓度的顺铂(0.1,0.25,0.5,1.0,2.0μg/ml)单独或联合作用48小时、72小时对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。　　 结果:　　 1.掌叶半夏经丙酮梯度沉淀得到的掌叶半夏粗蛋白,经假配基亲和层析后浓缩得到了部分纯化的中间提取物,经凝胶层析后取各个峰及其蛋白峰洗脱液进行SDS-PAGE,并用考马斯亮蓝G-250染色得到了一条分子量约为44KD的条带。　　 2.用CCK-8法检测不同浓度的掌叶半夏总蛋白作用48小时及72小时对卵巢癌SKOV3细胞生长的影响。　　 (1).与空白组比较,各个梯度的掌叶半夏总蛋白对SKOV3细胞的抑制作用比较差异有统计学意义(P<0.001)。利用曲线拟合计算其48小时及72小时的IC50分别为138.959μg/ml,62.603μg/ml。随着作用时间的延长,其对应的细胞半数抑制率(IC50)逐渐下降。掌叶半夏总蛋白组与顺铂组对细胞作用不同时间后,两组之间生长抑制率比较有统计学差异(P值均<0.05)。　　 (2).不同浓度的掌叶半夏总蛋白与化疗药物DDP联合应用时,顺铂浓度较低时(约0.1μg/ml)时即对SKOV3细胞有增殖抑制作用,随着浓度升高这种生长抑制作用增强。100μg/ml、200μg/ml掌叶半夏总蛋白联合DDP对SKOV3细胞的抑制作用比较差异有统计学意义,P值均<0.001),据曲线拟合计算其72h的IC50由0.453μg/ml降至0.223μg/ml。　　 3.Annexin V-FITC法测定细胞凋亡结果(1).不同浓度的掌叶半夏总蛋白及顺铂单独作用SKOV3细胞的早期凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.001)，掌叶半夏总蛋白组与顺铂组的细胞分别与空白组比较,晚期凋亡率和坏死率比较差异有统计学意义(P值均小于0.01),只有浓度(200μg/ml、400μg/ml)的掌叶半夏总蛋白对细胞晚期凋亡率有影响,而低浓度的掌叶半夏总蛋白没有明显的影响,同时还不能认为不同浓度顺铂对卵巢癌SKOV3细胞晚期凋亡率及坏死率有明显的影响(与相邻上一浓度比较P值>0.05)。　　 (2).掌叶半夏总蛋白与顺铂单独作用于卵巢癌SKOV3细胞,两组早期凋亡率比较有统计学差异(t=3.892,P<0.05),可见与顺铂比较,掌叶半夏总蛋白也有相当的诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的作用。与顺铂组相比,400μg/ml掌叶半夏总蛋白联合1μg/ml DDP对卵巢癌SKOV3细胞同时作用48小时后掌叶半夏总蛋白能明显促进SKOV3细胞早期凋亡的发生,晚期凋亡及坏死的发生,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。　　 小结:　　 1.经假配基亲和层析和凝胶过滤层析相结合的纯化的方法可以得到相对较高纯度的掌叶半夏总蛋白。　　 2.卵巢癌SKOV3细胞经掌叶半夏总蛋白处理后,细胞生长受到抑制,随着时间延长和浓度增加,细胞生长抑制率增大,联合顺铂作用于细胞,其抑制作用更加显著。　　 3.掌叶半夏总蛋白能诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的发生,联合顺铂后早期及晚期凋亡率增加。