基于核酸适配体传感器对癌胚抗原高灵敏检测的研究

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癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)是参与细胞粘附并在胎儿发育过程中表达的糖蛋白。作为常见的肿瘤标志物之一,CEA在许多人类癌症中过表达,包括胃癌、结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌和胰腺癌,并在恶性肿瘤的鉴别诊断、疗效评价以及病情监测等方面具有十分重要的临床价值。因此,发展高灵敏的CEA检测方法对疾病的诊断及预后具有十分重要的意义。核酸适配体因其具有灵活性、可重复性、易于固定和再生等优点已被广泛应用于传感器领域。本研究主要依据荧光共振能量转移原理,通过几种不同发光材料(如碳点、芘、铜团簇和SYBR GreenⅡ等)、核酸适配体和石墨烯氧化物,设计出几种荧光生物传感器,从而实现对CEA高灵敏的检测。1.基于碳点标记的核酸适配体和叠氮官能化石墨烯氧化物对癌胚抗原的检测。将碳点与核酸适配体共价连接,使核酸适配体上带有荧光,带有荧光标记的核酸适配体与叠氮官能化石墨烯氧化物发生click反应,形成复合体,导致荧光被淬灭。加入CEA之后,CEA和核酸适配体结合导致核酸适配体构象发生变化,荧光得以恢复。2.基于羧基官能化石墨烯氧化物结合二氧化硅银的三明治结构对癌胚抗原的检测。三明治结构能够构建低背景信号的检测平台,从而提高检测的灵敏性。同时,聚乙二醇的加入能够去除纳米材料表面的非特异性吸附。此外,我们还在传感器中引入了二氧化硅银(Ag@SiO2)用来增强荧光检测信号。3.基于铜团簇(copper nanoclusters,CuNCs)标记的核酸适配体结合新型叠氮官能化石墨烯氧化物对癌胚抗原的检测。本章使用了一种新的制备方法合成叠氮官能化石墨烯氧化物,该方法有效去除了制备过程对人体的毒副作用,同时节省了制备时间。叠氮官能化石墨烯氧化物(GO-N3)能与CuNCs-DNA发生click反应,通过加入CEA前后荧光强度的变化达到检测CEA的目的。进一步采用DNase I对传感器进行酶切循环,达到对信号进行放大的作用。4.基于磁性石墨烯氧化物和多肽构建的荧光生物传感器对癌胚抗原的检测。利用磁性石墨烯氧化物(GO-Fe3O4)淬灭SYBR GreenⅡ染色的核酸适配体对CEA进行检测。同时我们在GO-Fe3O4表面引入多肽,多肽能够去除蛋白质在GO表面的非特异性吸附,提高检测的灵敏性。综上所述,基于荧光能量共振转移原理,我们使用多种纳米材料和荧光材料构建了四种荧光生物传感器,实现了对CEA的高灵敏检测,同时还具有较好的选择性。CEA检测方法与技术的发展,有助于疾病的早期发现和预防,为人类的健康提供支持和帮助。
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