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犬肿瘤性疾病是小动物临床上常发的一种疾病,随着人们生活水平的提高和宠物诊疗行业的发展,已经越来越受到重视。犬临床常发的肿瘤主要有乳腺肿瘤、皮肤及软组织肿瘤、肛周肿瘤、睾丸肿瘤和阴道肿瘤,其中乳腺肿瘤是临床最常见肿瘤之一,随着母犬饲养年限的增长而更容易发生。为了探讨犬常见肿瘤的发病规律,收集2014-2017年间哈尔滨地区部分宠物医院犬肿瘤病历271例。收集每个临床肿瘤病例的基本信息,并对患病动物的品种、性别、年龄、发生部位和饮食情况与肿瘤发生的关系进行统计分析。为了准确诊断犬常发肿瘤的良、恶性,采用组织病理学方法对271例患肿瘤犬进行病理学诊断。为了探讨肿瘤标记物在犬乳腺肿瘤的早期诊断中的应用价值,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法对138例乳腺肿瘤患犬的CA15-3、CEA、SF、VEGF、CA199、CA125、SCCAg、NSE、HER-2、CYFRA21-1、AFP和TSGF共12种血清肿瘤标记物进行筛查,找出敏感性高,特异性好的4种血清肿瘤标记物并进行联合检测。为了探讨犬乳腺肿瘤组织中4种肿瘤标记物的表达情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测犬乳腺肿瘤组织中基因和蛋白水平的表达。结果:(1)271例确诊肿瘤病例中,恶性肿瘤80例,占全部肿瘤的29.5%;上述病例中,乳腺和皮肤是犬肿瘤的高发部位,分别占全部患犬的50.9%和31.4%;其中乳腺肿瘤138例,恶性肿瘤56例,占全部乳腺肿瘤的40.6%;病犬年龄1-17岁不等,平均发病年龄为9.6岁,7岁以后是犬患肿瘤的高发期,中老年犬仍为主要发病群体,但低龄犬发病数量正逐年上升;各品种犬均可发生肿瘤,其中杂种犬发病率最高,其次是贵宾犬和京巴犬,且主要为乳腺肿瘤;饮食习惯主要以剩饭剩菜类和肉拌饭类为主,分别占患犬总数的42.4%和32.5%;部分肿瘤类型与犬的性别和是否绝育有关。(2)ELISA方法检测血清肿瘤标记物,乳腺癌组与乳腺良性疾病组和健康对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。乳腺良性疾病组和健康对照组比较,除了SF、VEGF和CA199三种标记物差异有统计学意义(P<0.05)外,其他的标记物差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)通过对12种肿瘤标记物进行筛查,敏感性和特异性均较好的4种标记物为CA15-3、CEA、SF和HER-2。(4)单项检测CA15-3的敏感性、特异性和准确度分别为51.8%、93.9%和76.8%;CEA的敏感性、特异性和准确度分别为44.6%、84.1%和68.1%;SF的敏感性、特异性和准确度分别为62.5%、85.4%和76.1%;HER-2敏感性、特异性和准确度分别为46.4%、84.1%和68.8%。单项检测SF的敏感性最高,CA15-3的特异性最高。4种肿瘤标记物联合检测的敏感性、特异性和准确度分别为85.7%、78.1%和81.2%。敏感性和准确性均升高,特异性降低。(5)qRT-PCR法检测犬乳腺肿瘤组织中CA15-3、CEA、SF、NSE和HER-2 mRNA的相对表达量,恶性肿瘤组织明显高于良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织(P<0.001)。除了SF基因外,其他的标记物基因良性乳腺肿瘤均与正常乳腺组织无显著差异(P>0.05),与血清中检测的结果类似。(6)Western blot检测犬乳腺肿瘤组织中CEA、SF、NSE和HER-2蛋白的表达量,恶性肿瘤组织中明显高于良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织(P<0.001)。除了SF蛋白外,其他的标记物蛋白在良性乳腺肿瘤均与正常乳腺组织中无显著差异(P>0.05)。结论:本研究为犬肿瘤的流行病学及诊断提供参考依据,对犬肿瘤的预防和诊断有一定的借鉴意义。筛查出用于犬乳腺肿瘤早期诊断的肿瘤标记物CA15-3、CEA、SF和HER-2。通过肿瘤标记物联合检测和单项检测分析,联合检测的敏感性和准确性均高于单项检测,可提高犬乳腺癌的早期诊断率。