【摘 要】
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目的:探索miR-590-3p、Caspase-1和IL-1β在高浓度葡萄糖（高糖）孵育的人视网膜微血管内皮细胞（HRMECs）中的表达变化情况,阐明细胞焦亡在糖尿病性视网膜病变（DR）中的作用,并进一步揭示miR-590-3p调控细胞焦亡的分子机制。方法:利用高糖体外孵育HRMECs构建DR细胞模型,通过蛋白质印迹实验、免疫荧光染色等实验检测Caspase-1、IL-1β、NLRP1、NOX4、
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目的:探索miR-590-3p、Caspase-1和IL-1β在高浓度葡萄糖（高糖）孵育的人视网膜微血管内皮细胞（HRMECs）中的表达变化情况,阐明细胞焦亡在糖尿病性视网膜病变（DR）中的作用,并进一步揭示miR-590-3p调控细胞焦亡的分子机制。方法:利用高糖体外孵育HRMECs构建DR细胞模型,通过蛋白质印迹实验、免疫荧光染色等实验检测Caspase-1、IL-1β、NLRP1、NOX4、TXNIP、NLRP3和ROS在正常HRMECs以及DR细胞模型中的表达情况。通过转染miR-590-3p mimic、miR-590-3p inhibitor、NLRP1 si RNA、NOX4 si RNA以及NOX4过表达质粒改变细胞内miR-590-3p、NLRP1和NOX4的表达水平,并利用荧光素酶报告基因实验进一步研究miR-590-3p和NLRP1、NOX4的调控关系。此外,通过检测玻璃体样本中细胞焦亡相关分子IL-1β的表达情况,进一步阐明细胞焦亡在临床DR中的意义。结果:在DR细胞模型中,焦亡相关分子Caspase-1和IL-1β表达升高,同时miR-590-3p表达下降,NLRP1和NOX4表达上升。在正常细胞中利用miR-590-3p inhibitor抑制miR-590-3p的水平,发现NLRP1、NOX4/ROS/TXNIP/NLRP3以及Caspase-1的表达水平上调,细胞活性降低。荧光素酶报告基因实验证实miR-590-3p和NLRP1、NOX4之间存在直接结合位点。此外,在DR细胞模型中,过表达miR-590-3p或者抑制NLRP1、NOX4后,细胞活性明显增强,细胞焦亡水平减弱。通过荧光素酶报告基因实验发现,上调的IL-1β可以通过抑制miR-590-3p初级转录产物的编码基因DNA启动子活性,从而进一步降低miR-590-3p的表达水平。结论:在DR细胞模型中,miR-590-3p表达水平下降,从而减弱了miR-590-3p对NLRP1的抑制作用,同时激活了NOX4/ROS/TXNIP/NLRP3通路,上调的NLRP1以及NLRP3介导了高糖状态下HRMECs细胞焦亡的发生。此外,上调的焦亡分子IL-1β通过抑制pri-miR-590编码基因启动子活性,从而进一步抑制了miR-590-3p的表达,这种IL-1β依赖的正反馈环路加剧了DR的进展。
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