【摘 要】
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HI44a（IgG2a）是一种鼠源性抗CD44单克隆抗体，其结合位点位于CD44分子胞外区临近透明质酸结合位点处。我室的研究发现：（1）HI44a能够有效诱导急性髓性白血病M2-M5亚型细胞的分化及凋
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HI44a（IgG2a）是一种鼠源性抗CD44单克隆抗体，其结合位点位于CD44分子胞外区临近透明质酸结合位点处。我室的研究发现：（1）HI44a能够有效诱导急性髓性白血病M2-M5亚型细胞的分化及凋亡；（2）HI44a能够抑制白血病细胞系THP-1增殖，诱导其凋亡；（3）HI44a的作用可能是通过抑制癌基因及抗凋亡蛋白的表达，增强特定的分化诱导因子的表达，降低线粒体膜电位实现的。（4）CD44是急性髓性白血病诱导分化及凋亡治疗的一个有效靶点。但是，HI44a是鼠源性单克隆抗体，直接应用于临床会引起人体对鼠源性抗体的免疫反应（HAMA反应），这是鼠源性抗体应用于临床的主要障碍，而基因工程抗体较好地解决了这个问题。 因此，我们对抗CD44鼠源性单克隆HI44a进行了基因工程改造，利用PCR方法从抗CD44单链抗体（ScFv）表达载体PET-22b上扩增出抗CD44抗体轻链可变区基因（VL）、重链可变区基因（VH），然后分别将VH、VL基因重组到含人轻链恒定区CL和人重链恒定区CH1的载体pYZL和pYZH中，构建成扩增载体pYZLcd44和pYZHcd44，最后应用内切酶切分别从pYZLcd44和pYZHcd44中消化下CL-VL、CH1-VH，将它们连接入表达载体pYZF中，构建嵌合抗CD44 Fab’表达载体pYZFcd44，并在16c9菌中表达。大量发酵16c9菌，表达嵌合抗CD44Fab’蛋白。应用SDS-PAGE和Western blotting的方法确认嵌合抗CD44 Fab’蛋白有表达。从细菌周质腔中提取可溶性表达的蛋白，结果发现可溶性表达的抗CD44F ab’蛋白量非常微少，大部分为不可溶
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