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背景食管癌是发病率较高、预后较差的实体肿瘤之一。肿瘤直径小于1mm时,可以通过自身渗透作用为之提供营养,当肿瘤直径达到1-2mm时,肿瘤内部发生了血管的新生现象,可以为肿瘤的生长提供充足的营养,新生血管可以促进肿瘤的发展、浸润和转移。多种生长因子共同参与调节着肿瘤血管的生成。其中我们研究最为广泛和深入的生长因子是血管内皮生长因子(VEGF),主要调控着肿瘤血管的生成,促进了多种恶性肿瘤的生长、转移[1-3]。另一类较大的生长因子家族是成纤维生长因子(FGF)家族,其中b FGF是第一个被鉴定的促血管生成因子[4],在血管生成中也起着重要的调节作用。诱导分化概念的提出,为肿瘤的治疗提供了一种新的、有效的治疗理念。越来越多的肿瘤专家开始关注诱导分化治疗的研究进展。全反式维甲酸(ATRA)作为一种最重要的诱导分化剂,已经在白血病及部分实体肿瘤中得到应用。本研究通过体外实验观察ATRA对食管癌细胞系Eca109中VEGF、b FGF蛋白和m RNA表达的影响,为ATRA在食管癌抗血管生成的治疗提供理论依据。研究不同浓度ATRA对食管癌细胞系Eca109 VEGF和b FGF表达的影响。方法终浓度分别为0、1、5、10μmol/L的ATRA作用于人食管癌Eca109细胞,采用噻唑蓝比色法(MTT)评价药物对细胞的增殖抑制情况;通过划痕实验测定ATRA作用于Eca109 48h前后的迁移能力;采用细胞免疫组织化学法和逆转录酶聚合链式反应(RT-PCR)分别检测不同浓度ATRA作用于Eca109 48h后VEGF、b FGF蛋白和m RNA的表达情况。结果1.MTT结果:作用于24h后,实验组,即1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L组的增殖抑制率分别为:(44.57±1.36)%、(50.26±1.64)%、(54.24±1.39)%;48h后,上述实验组的增殖抑制率分别为:(54.29±0.15)%、(59.52±0.74)%、(65.45±4.33)%;72h后,上述实验组的增殖抑制率分别为:(66.39±0.87)%、(74.33±2.69)%、(85.24±1.49)%。而对照组,0μmol/L组三个时间点的抑制率均为0.00%。经统计学分析,各个实验组分别与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05),且实验组之间进行两两比较,差异也具有统计学意义(P<0.05)。2.划痕实验结果:1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca109 48h后,细胞的迁移率分别为(50.82±1.61)%,(46.80±5.12)%,(32.31±3.25)%,对照组(68.81±2.64)%。0h各组细胞的迁移率均为0.00%。实验组数据分别与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05),且实验组之间两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.免疫组化结果:VEGF蛋白阳性表达体现为细胞内出现的棕黄或棕褐色颗粒状,主要分布于细胞质,核膜亦可见阳性表达。b FGF蛋白阳性表达为细胞核内被染成棕黄色,并且胞浆、核膜可见阳性表达。0、1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca109 48h后,细胞内VEGF蛋白相对表达量依次为:(85.43±0.53)×10-2、(77.45±0.51)×10-2、(51.43±0.34)×10-2、(21.74±0.11)×10-2;b FGF蛋白的相对表达量依次为:(71.41±0.52)×10-2、(51.63±0.46)×10-2、(38.44±0.32)×10-2、(11.24±0.21)×10-2。可以看出,随着药物浓度的增加,各个指标的相对表达量逐渐减少,经统计学分析,各个实验组分别与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),且实验组之间进行两两比较,差异也具有统计学意义(P<0.05)。4.PCR结果:0、1、5、10μmol/L ATRA作用于Eca109细胞48h后,VEGF m RNA表达量依次为:(12.40±1.11)×10-2、(7.27±0.71)×10-2、(4.63±0.45)×10-2、(1.62±0.25)×10-2;b FGF m RNA表达量依次为:(17.96±0.46)×10-2、(15.32±0.33)×10-2、(12.04±0.50)×10-2、(9.13±0.30)×10-2。可以看出,随着药物浓度的增加,各个指标的表达量逐渐减少,经统计学分析,各个实验组分别与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),且实验组之间进行两两比较,差异也具有统计学意义(P<0.05)。结论1、在一定浓度范围内,ATRA对食管癌Eca109细胞的增殖具有抑制作用,并且随着剂量的增大或作用时间的延长,抑制作用越明显,因此具有剂量和时间依赖性。2、在一定浓度范围内,ATRA可以抑制Eca109细胞的迁移,抑制VEGF、b FGF的m RNA和蛋白的表达,并且随着药物浓度的增加,抑制作用越明显。3、ATRA可能通过下调VEGF、b FGF基因的表达影响食管癌Eca109血管新生从而抑制其生长。