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间质性肺纤维化由于发病率逐年增加，发病机制不清，缺乏有效的治疗方法等原因，日益受到关注。该病早期反应为肺泡壁／肺泡腔以及终末细支气管及其周围结缔组织的炎症病变，继之肺泡壁破坏，细胞外基质沉积，从而造成肺功能障碍，病人多死于进行性加重的肺纤维化所致呼吸衰竭。在间质性肺纤维化疾病谱中多数为特发性肺纤维化，后者是前者最典型的原型代表，其发病原因不明，病程平均为4年，预后类似于肺癌，所有药物即使对肺功能稍有改善，也由于其显著的副作用而妨碍了应用。故寻找有效的治疗方法现已成为呼吸学界亟待解决的难题之一。 博莱霉素是一种抗肿瘤药物，普遍认为在人体和动物模型内均可产生剂量依赖型的肺损伤和肺纤维化。给与鼠类博莱霉素注入，由于其具有与人类特发性肺纤维化相似的病理改变而被广泛应用。 TGF-βs(转化生长因子-βs)是目前发现重要的致纤维化细胞因子家族，它通过自分泌／旁分泌形式调控细胞的生长和细胞外基质沉积。TGF-βs可作用于多个环节刺激细胞外基质成分的合成和沉积，包括上调基质成分的转录、翻译和翻译后的步骤，促进基质蛋白的产生，减少基质降解酶以及增加降解酶抑制剂的合成。同时TGF-βs还可刺激多种细胞因子的产生，并与这些细胞因子协调作用，如与PDGF(血小板源性生长因子)和FGF(成纤维细胞生长因子)共同刺激成纤维细胞增殖和合成胶原。哺乳类动物中，TGF-βs存在三种异构体，即TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，其生物学功能大致相同。其中TGF-β1研究得最广泛，其在纤维化性疾病如肝纤维化、肾间质纤维化、皮肤疤痕形成等疾病中均发挥重要作用。 TGF-βs在体内经过活化后，与其特异性受体相结合，从而发挥各种生物学效应。TGF-βs在体内共有三种类型受体，即TβRⅠ、TβRⅡ和TβR111，TpRI和TpRn因其含有丝氨酣苏氨酸激酶结构区域，参与信号传递过程，而显得尤为重要。TGF一你首先与TpRn相结合，再连接TpRI共同形成TpRn一TGF一ps一TpRI异侧复合体。活化的TpRn使TpRI激酶磷酸化，从而激活TpRI，活化后的TpRI可继续传递信号到下游的细胞内底物Smad。，，进一步完成TGF一你信号转导至细胞核内过程，发挥TGF-你的多种生物学作用。TpRlll只负责将 TGF一伽信号呈递给受体分子，调节TGF一伽与受体结合。 肺纤维化中，细胞外基质大量沉积是导致肺通气和换气功能异常的直接原因，其中胶原是细胞外基质的主要蛋白成分，分布在肺内的主要有I、111、W、V型胶原。体外研究表明TGF一田可刺激肺泡上皮细胞、血管平滑肌细胞、肺成纤维细胞等合成I、l、IV、V型胶原。TGF一团生物学作用的发挥与其受体密切相关，但关于TGF一邵及其受体在体内肺纤维化形球过程中相互作用，影响肺内胶原异常分布研究尚少。亡 本实验采用Wistar健康雄性大鼠为研究对象，实验组给予气管内注射含博莱霉素0.smg/kg体重的生理盐水，对照组给予等量的生理盐水注人。两组动物分别于气管内注射后1天，3天，7天，14天和28天各处死5只。分离肺脏并将肺内血液冲洗干净，在福尔马林中固定，常规脱水、石蜡包埋，留待作免疫组化之用。取厚4林m的肺组织切片经过脱蜡、水化，严格按照免疫组织化学ABC试剂盒说明书操作。分别检测了给予博莱霉素后1天，3天，7天，14天和28天的TGF一pl、T日Rl、TpRll和胶原I、111、lV、V型在肺组织中的分布。染色后的片子根据着色程度不同分级:(一)无着色，(土)浅黄色，(+)棕黄色，(++)深棕黄色，(+++)深褐色。(+)以上确定为阳性反应，在高倍镜(x 200)下计数200个肺泡巨噬细胞，求出阳性巨噬细胞表达百分比。应用图像分析系统，对待测切片上免疫反应阳性区域进行相对百分比面积测定，每张切片选上、中、下、左和右5个免疫反应较强视野进行分析，统计方法采用t检验。 本文在论文一中重点阐述了TGF一邵在正常大鼠肺组织中的分布和在肺纤维化时的异常表达。结果提示TGF一pl可广泛分布于正常大鼠的肺组织，见于肺泡巨噬细胞、支气管上皮细胞、支气管周围结缔组织、血管周围结缔组织和肺内间质。实验组表达明显增强，在肺泡巨噬细胞和支气管上皮细胞第7天染色达高峰表达，14天、28天持续阳性表达。肺内间质细胞的表达高峰则出现在第28天。说明TGF一田早期主要来源于肺泡巨噬细胞，而支气管上皮细胞对于肺纤维化的发生、进展期TGF一团分泌过多也具有重要作用，晚期肺纤维化时，大量的间质细胞则成为TGF一田的持续重要来源。 论文二研究了TpRI和TpRn在正常大鼠肺组织和致纤维化肺组织中的分布。在对照组TpRI和T归Rn可分布于肺泡巨噬细胞、气管周围及血管周围结缔组织，支气管上皮细胞和肺内间质偶有表达。实验组两种受体表达均明显增强，14一28天表达达高峰。TGF一田在肺泡巨噬细胞表达为第7天达高峰，TpRI和TpRn在肺泡巨噬细胞的表达高峰则出现在14天，滞后一周，推测TGF一田，也可以通过自分泌调节方式使其受体水平上调，作用于肺泡巨噬细胞，使肺泡巨噬细胞进一步产生TGF一娜及其它细胞因子。在14一28天时，?