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背景与目的:胃癌（Gastric cancer,GC）是最常见的恶性肿瘤之一,胃癌患者死亡率居高不下,导致胃癌患者预后不良的主要原因是早期胃癌患者检出率低。传统的胃癌检查手段主要有组织病理、影像学等,但患者确诊后往往处于进展期。因此迫切需要找出新的检测手段提高早期胃癌患者检出率,而液体活检最具社会价值的应用是肿瘤早期筛查。越来越多的证据支持微小RNA（miRNA）在肿瘤发生发展中发挥重要作用,然而miRNA在人类胃癌中的作用在很大程度上仍是未知。因此本研究旨在通过生物信息学筛出与胃癌发生相关的潜在风险miRNA,寻找可作为胃癌患者血浆潜在的诊断标志物,并初步探索其在胃癌发生中的作用及作用机制。方法:（1）通过公开的胃癌表达谱数据,结合生物信息学分析,筛选出在胃癌进程中潜在的风险miRNAs,RT-PCR检测其在胃癌患者和正常人血浆中的表达差异。（2）RT-PCR检测miR-199b-5p在胃癌细胞（SGC7901、MGC803和AGS）中的表达水平。同时在SGC7901、MGC803细胞中建立稳定转染的miR-199b-5p-mimic和miR-199b-5p-inhibitor细胞模型,检测过表达/抑制miR-199b-5p对SGC7901、MGC803细胞miR-199b-5p m RNA表达水平的影响。（3）通过Ed U细胞增殖实验、集落形成实验、Transwell迁移实验、细胞划痕实验和Western blot检测EMT相关蛋白证明miR-199b-5p在体外对胃癌细胞生物学作用的影响。（4）构建裸鼠皮下移植瘤模型及肺转移瘤模型研究miR-199b-5p在体内对胃癌细胞的生物学作用。（5）生物信息学预测miR-199b-5p的候选靶基因,RT-PCR和免疫组化检测潜在靶基因HHIP在胃癌细胞和组织的表达水平。（6）双荧光素酶实验验证miR-199b-5p与其潜在靶基因HHIP的相互作用,RT-PCR和细胞免疫荧光检测miR-199b-5p表达水平的改变对HHIP的影响。（7）在SGC7901、MGC803细胞中建立稳定转染的miR-NC+lv-NC、miR-199b-5p-mimic+lv-NC、miR-NC+lvHHIP、miR-199b-5p-mimic+lv-HHIP的细胞模型,RT-PCR检测HHIP表达水平。（8）通过一系列细胞功能实验进行恢复实验,进一步探讨miR-199b-5p在胃癌细胞的作用机制。结果:（1）通过生物信息学分析,我们筛选出在胃癌组织显著上调并与胃癌患者不良预后相关的风险miR-199b-5p,RT-PCR结果显示miR-199b-5p在胃癌患者血浆中显著高表达（p＜0.05）。（2）RT-PCR结果显示,与正常胃粘膜上皮细胞GES1相比,miR-199b-5p在胃癌细胞SGC7901和MGC803均显著上调（p＜0.001）,但在AGS中无统计学差异（p＞0.05）;与miR-NC组相比,SGC7901和MGC803细胞中miR-199b-5p-mimic组的miR-199b-5p表达均升高（p＜0.001）,miR-199b-5p-inhibitor表达均降低（p＜0.05）。（3）与miR-NC组相比,过表达miR-199b-5p可以显著促进SGC7901和MGC803细胞增殖（p＜0.05）、迁移（p＜0.05）和EMT进程,敲低miR-199b-5p表达后则显著抑制SGC7901和MGC803细胞增殖（p＜0.05）、迁移（p＜0.05）和EMT能力。（4）裸鼠皮下移植瘤模型及肺转移瘤模型结果显示:与miR-NC组相比,miR-199b-5p-mimic组明显促进SGC7901细胞在裸鼠体内增殖（p＜0.05）和肺转移能力（p＜0.05）,miR-199b-5p-inhibitor组显著抑制SGC7901细胞在裸鼠体内增殖（p＜0.05）和肺转移能力（p＜0.01）。（5）生物信息学预测miR-199b-5p的潜在靶基因为HHIP;RT-PCR结果显示,与GES1相比,HHIP m RNA水平在SGC7901、MGC803和AGS中均显著低表达（p＜0.01）;免疫组化结果显示HHIP主要表达于细胞胞浆,并且在胃癌组织阳性反应较弱。（6）双荧光素酶实验结果显示miR-199b-5p能直接结合HHIP;RT-PCR结果显示,与miR-NC组相比,SGC7901和MGC803细胞的miR-199b-5p-mimic组HHIP表达水平下调（p＜0.05）,miR-199b-5p-inhibitor组HHIP表达水平上调（p＜0.05）;细胞免疫荧光结果显示:与miR-NC组相比,SGC7901和MGC803细胞的miR-199b-5p-mimic组HHIP蛋白表达强度受抑制,miR-199b-5p-inhibitor组HHIP表达水平呈现升高趋势。（7）RT-PCR结果显示SGC7901和MGC803细胞miR-199b-5p-mimic组中共转染lv-HHIP可以部分逆转miR-199b-5p表达水平（p＜0.05）。（8）细胞恢复实验结果显示,在SGC7901和MGC803细胞miR-199b-5p-mimic组中共转染lv-HHIP可以部分逆转miR-199b-5p-mimic对胃癌细胞增殖（p＜0.05）、迁移（p＜0.05）和EMT的作用。结论:（1）生物信息学筛选出的miR-199b-5p可作为预测胃癌发生的潜在分子标志物之一;（2）miR-199b-5p在体内外通过促进胃癌细胞增殖、迁移和EMT而发挥作用;（3）miR-199b-5p可通过靶向HHIP在胃癌中发挥癌基因的作用;（4）miR-199b-5p可作为胃癌的潜在治疗靶点。