【摘 要】
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2-苯乙醇是一种芳香醇,具有玫瑰花香,普遍应用于烟草、食品、化妆品等行业中。近年来,天然2-苯乙醇市场需求不断增加,通过酵母生物转化生产2-苯乙醇,具有很大的潜在价值。但
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2-苯乙醇是一种芳香醇,具有玫瑰花香,普遍应用于烟草、食品、化妆品等行业中。近年来,天然2-苯乙醇市场需求不断增加,通过酵母生物转化生产2-苯乙醇,具有很大的潜在价值。但是高浓度的2-苯乙醇对酵母自身有很大的毒性,抑制酵母的生长。本课题通过对实验室保藏菌株S.cerevisiae CWY132进行紫外诱变、氯化锂紫外复合诱变、60Coγ射线诱变、易错PCR等诱变方法育种,获得了 21株2-苯乙醇耐受性菌株。并且对耐受性突变菌株考察了耐受性和产量的关系,其中CWY132-18-17的耐受性和产量都比较高,耐受性比出发菌株提高了 50%,产量提高了 15.2%,L-苯丙氨酸的摩尔转化率达到103.67%。紫外诱变是最常用的育种方法,但是突变率很低。通过大量的筛选,紫外诱变获得了 12株高耐受性突变菌株。本论文通过氯化锂紫外复合诱变,使得突变率提高了大约10倍。氯化锂紫外复合诱变获得了 3株突变株,并且可以耐受固体平板上3.3g/L的2-苯乙醇。由于上述方法筛选效率相对来说比较低,突变不定向,所以在前辈工作经验的基础上,运用了 60Coγ射线诱变育种的方法。通过此方法获得了 5株2-苯乙醇耐受性突变菌株。由于易错PCR可以在更大程度上改变基因,运用此方法,以获得基因改变比较大的突变体。此方法中易错PCR条件摸索是关键,由于此方法不确定因素太多,最终只得到一株耐受性突变菌株。综上,60Coγ射线诱变育种,育种周期短,突变频率大,是比较合适的育种方法。
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