复方野菊验方是西安市某医院使用的一种院内处方,处方由野菊花、蒲公英、紫花地丁和白花败酱草等组成。该方外用有着自己独特的优势,组方以野菊花、蒲公英等清热解毒祛湿药物为主,它以清洁创面,控制感染为主要目的,临床上主要用于治疗感染性皮肤病,已取得一定疗效。本课题主要研究目的是将复方野菊验方制成一种稳定的外用洗剂,使该处方的临床应用更加便利,并考察其初步药效学,探讨其作用机制与主要不良反应,为临床安全使用提供数据支持。从而期望中药复方野菊洗剂能够成为治疗细菌感染性皮肤病的主要药物,发挥中药制剂在临床上治疗细菌感染性皮肤病的独特优势,减少临床上治疗细菌感染性皮肤病对抗生素的依赖性,从而减缓细菌耐药性的发生。主要研究内容如下:(1)复方野菊洗剂制备工艺研究。在分析单因素实验的基础上,采用HPLC法测定复方野菊洗剂处方中蒙花苷含量和干浸膏得率作为实验优化指标,采用响应面实验设计法对影响提取的主要因素--加水倍数、提取次数、提取时间进行优化,得出最佳提取工艺参数为煎煮时间50 min,加水倍数12倍,提取次数2次,合并两次煎煮滤液后浓缩,加入防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾,混匀,灌封,灭菌即得。蒙花苷含量验证实验结果显示无显著性差异(p>0.05),表明优选出的制备工艺重现性好、稳定性高,可供工业生产参考。(2)质量控制研究。参照2015版中国药典对复方野菊洗剂性状、pH值和微生物限度等项目进行了检查,检查结果均符合药典规定。定性考察采用薄层色谱法对复方野菊洗剂处方中野菊花和蒲公英进行鉴别,结果显示复方野菊洗剂供试品色谱图与野菊花、蒲公英对照品在同一位置显相同颜色荧光斑点;采用HPLC法测定复方野菊洗剂中蒙花苷含量,测定方法专属性和稳定性均良好;稳定性试验结果显示无显著性差异(p>0.05),最终确立复方野菊洗剂中蒙花苷含量不低于95μg/mL。(3)抗菌活性及其机制研究。采用宏量肉汤二倍稀释法,测定复方野菊洗剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌和变形杆菌的MIC分别为生药浓度31.25 mg/mL、62.5 mg/mL和125 mg/mL;联合抗生素莫匹罗星抗菌活性实验结果表明,复方野菊洗剂可有效降低莫匹罗星对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和变形杆菌的用药浓度;抗菌机制实验通过测定金黄色葡萄球菌培养液中电导率、核酸、蛋白质和碱性磷酸酶(AKP),实验结果表明复方野菊洗剂给药组和无菌纯水对照组存在显著差异(p<0.01),由此说明复方野菊洗剂可有效破坏金黄色葡萄球菌细胞壁和细胞膜的完整性。(4)皮肤刺激性实验。采用健康大鼠作为实验对象考察复方野菊洗剂对皮肤刺激性毒性,通过对大鼠正常完整皮肤和破损皮肤刺激性毒性实验来评价复方野菊洗剂对皮肤不良反应。主要实验内容包括皮肤急性毒性试验、皮肤过敏试验、急性皮肤刺激性实验和多次给药皮肤刺激性实验。结果显示大鼠皮肤未出现红斑、水肿、渗液、充血、溃烂以及色素沉着等可逆性炎性症状,表明复方野菊洗剂对人体皮肤安全无刺激性。