细胞色素P450酶（cytochrome P450，CYP），主要存在于肝微粒体中，在外源性化合物的生物转化中起着十分重要的作用，参与临床上约 80%常用药物的代谢。CYP酶系主要有CYP1、CYP2和CYP3三个家族，相比而言，比较重要的包括以下10种CYP亚型：CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4和CYP3A5。CYP催化反应是体内药物代谢的关键步骤，而影响药物在体内的药动学变化的根本原因是参与代谢的CYP酶的含量和活性存在较大个体差异。　　随着蛋白定量技术的迅速发展，稳定同位素稀释内标-多反应监测-质谱技术（SID-MRM-MS）因其特有的重现性和准确性已成为较理想的蛋白定量方法。然而，目前对CYP含量和活性的研究仅限于其在肝微粒体中的含量及活性。尽管肝微粒体作为一种传统的研究CYP酶的体系被广泛沿用，但是为了客观反映肝脏的真实状态，准确地预测体内的实际情况，有必要对肝脏从微观到宏观多水平的生理参数进行分析和讨论。因此确定10种CYP亚型在微粒体、肝组织、肝脏中的含量以及在酶水平、微粒体水平、肝组织水平和肝脏水平的活性，并研究同一水平10种CYP亚型的含量与活性的相关性，不同水平同种CYP亚型的含量间及活性间的相关性，以期为临床上个体化合理用药提供重要的生理值参考。　　方法　　1 肝脏标本　　收集正常人肝标本90例，男性34例，女性56例，年龄在20~75岁之间，饮酒12例，抽烟12例。　　2 人肝微粒体蛋白浓度的测定　　采用低温差速离心法制备人肝微粒体，Bradford法测定人肝微粒体蛋白浓度。　　3 微粒体中CYP含量与活性的测定　　稳定同位素稀释内标-多反应监测-质谱技术测定人肝微粒体中10种CYP的含量，选用10种CYP的体外探针药物测定其相应的酶活性。　　4 酶水平CYP活性的测定　　酶水平CYP的活性=微粒体水平CYP的活性/微粒体中CYP亚型的含量　　5 肝组织水平CYP含量与活性的测定　　肝组织中CYP含量=微粒体中CYP含量×每克肝脏中微粒体蛋白含量（MPPGL）　　肝组织中CYP活性=微粒体中CYP活性×MPPGL　　6 肝脏水平CYP含量与活性的预测　　肝脏中CYP含量=肝组织中CYP含量×肝重比（LW/BW）　　肝脏中CYP活性=肝组织中CYP活性×（LW/BW）　　7 统计学方法　　采用SPSS21.0软件对所有数据进行统计学分析，用GraphPad Prism 5.0作图软件作图。因本实验所得数据大部分不符合正态分布，故采用非参数检验分析，检验水准α为0.05。　　结果　　1 正常人肝中10种CYP的蛋白含量　　90例正常人肝标本中10种CYP的蛋白含量符合非正态分布。在微粒体中，CYP2E1的蛋白含量最高，中位数为101.84 pmol/mg protein，范围为11.49-166.20 pmol/mg protein。含量最低的为CYP2B6，中位数为4.54pmol/mg protein，范围为1.68-46.19pmol/mg protein。在肝组织中，CYP2C9的蛋白含量最高，中位数为3.67 nmol/g liver，范围为0.41-21.72nmol/gliver。含量最低的为CYP2B6，中位数为0.21nmol/g liver，范围为0.04-2.89nmol/g liver。与肝组织中类似，在肝脏中，CYP2C9的蛋白含量最高，中位数为77.85 nmol/kg，范围为9.37-440.88 nmol/kg。含量最低的为 CYP2B6，中位数为 4.75 nmol/kg，范围为 0.75-60.49 nmol/kg。　　2 正常人肝中10种CYP的活性　　90例正常人肝标本中10种CYP的Km、Vmax和CLint均符合非正态分布。10种CYP亚型的Km个体差异较小，均在40倍以下。10种CYP的Vmax在酶水平、微粒体水平、肝组织水平和肝脏水平的变化各有不同。除CYP1A2、CYP2A6和CYP2C8随着研究体系的扩大个体差异程度呈上升趋势以外，其他 CYP的个体差异程度从酶水平到微粒体水平均先减小，而后又增大，并且肝组织水平和肝脏水平的结果相近。与Vmax类似，10种CYP的CLint在酶水平、微粒体水平、肝组织水平和肝脏水平的变化也不尽相同。随着研究体系的扩大，CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4、CYP3A5的个体差异程度先减小后增大；CYP2A6与CYP2D6的个体差异程度先增大后减小；CYP2C8与 CYP2C19的个体差异程度一直增大，且肝组织水平和肝脏水平接近。　　3 10种CYP含量与活性的相关性　　基于微粒体水平、肝组织水平和肝脏水平分别对10种CYP的含量及其对应的活性进行相关性统计分析。　　3.1 微粒体水平　　CYP1A2的蛋白含量与其 Km无相关性（P>0.05），但与其 Vmax和 CLint具有显著相关性（P<0.05）。CYP2D6的蛋白含量与其 Km呈负相关（P<0.05），与其对应的CLint呈弱相关，但与其对应的Vmax无相关性。CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4的蛋白含量与其对应的微粒体水平活性均无相关性。其余CYP的含量与其活性均有不同程度的相关性。　　3.2 肝组织水平　　除 CYP2B6 以外，其他酶亚型的蛋白含量和其对应的活性均有显著相关性（P<0.05）。并且CYP1A2和CYP2E1的含量和其对应的Vmax和CLint有较强的相关性（r>0.60，P<0.05）。CYP2C19、CYP3A4和CYP3A5的含量和其对应的Vmax和 CLint有较弱的相关性（0.500.60，P<0.05）。CYP2C19、CYP3A4和CYP3A5的蛋白含量与其对应的Vmax和CLint相关性较弱（0.500.05）与其他酶蛋白含量有显著相关性（P<0.01）。CYP2B6的蛋白含量与其他任何酶蛋白含量之间均无相关性。CYP2D6的蛋白含量除与CYP2B6的蛋白含量无相关性外，与其他酶含量都有显著相关性（P<0.01）。CYP3A5的蛋白含量与CYP2B6、CYP2C19的蛋白含量无相关性，与其他酶含量都有显著相关性。　　4.2 肝组织水平　　CYP1A2的蛋白含量与其他所有酶的蛋白含量均有显著相关性（P<0.05），并且与CYP2C8、CYP2C9、CYP2E1的蛋白含量的相关性较强（P<0.01）。CYP2C9的蛋白含量与其他所有酶的蛋白含量均有显著相关性，并且与CYP1A2、CYP2C8、CYP2E1的蛋白含量的相关性较强（P<0.01）。除CYP2C19的蛋白含量与CYP3A5的蛋白含量无相关性（P>0.05）外，CYP2E1、CYP3A5的蛋白含量均与其他所有CYP的蛋白含量有显著相关性。　　4.3 肝脏水平　　除了CYP2B6的蛋白含量与CYP2C19、CYP3A4、CYP3A5、CYP2C19的蛋白含量无相关性（P>0.05）以外，其他酶含量均有显著相关性（P<0.01）。　　4.4 微粒体水平、肝组织水平与肝脏水平　　Spearman相关性分析分析90例正常人肝10种CYP的蛋白含量在微粒体水平、肝组织水平与肝脏水平之间的相关性。发现同一种CYP亚型蛋白含量在微粒体水平、肝组织水平、肝脏水平之间均有显著相关性（P<0.05）。　　5 10种CYP活性的相关性　　5.1 酶水平　　CYP1A2的Vmax与CYP2B6、CYP2C19、CYP3A4的Vmax无相关性（P>0.05），与其他 CYP的Vmax均有显著相关性（P<0.05）。CYP2C8的Vmax与CYP2C19的Vmax无相关性，与其他CYP的Vmax均有显著相关性。CYP2C19的Vmax只与CYP2A6有相关性。CYP3A5的Vmax与CYP3A4的Vmax的相关性最强。　　CYP2C19的CLint与 CYP2C9的CLint有显著相关性（P<0.05），与其他酶的CLint均无相关性（P>0.05）。CYP2D6、CYP2E1的CLint除与 CYP2C19的CLint无相关性外，与其他酶的CLint均有显著相关性。　　5.2 微粒体水平　　CYP2A6的Vmax只与 CYP2C19的Vmax有显著相关性（P<0.05），与其他CYP的Vmax均无相关性（P>0.05）。CYPC8的Vmax与 CYP2A6、CYP2E1的Vmax无相关性，与其他CYP的Vmax有较强相关性（P<0.01）。CYP2E1的Vmax与CYP2C9、CYP2C19的Vmax有显著相关性。　　CYP2A6的CLint与其他所有CYP的CLint无相关性（P>0.05）。CYP2D6的CLint只与CYP2B6的CLint有相关性（P<0.05）。CYP2C19的CLint只与CYP3A4 的CLint有显著相关性（P<0.01）。CYP2E1的CLint只与CYP1A2、CYP2C19的CLint有相关性。　　5.3 肝组织水平　　CYP2B6的Vmax只与CYP2A6的Vmax无相关性（P>0.05），与其他CYP的Vmax均有显著相关性（P<0.05）。CYP2D6的Vmax与CYP2A6的Vmax无相关性，与其他CYP呈弱相关。10种CYP的CLint均有显著相关性。　　5.4 肝脏水平　　CYP2A6的Vmax与 CYP2B6、CYP2D6的Vmax无相关性（P>0.05），其余各酶之间Vmax均有显著相关性（P<0.05）。CYP2C9的Vmax与CYP2E1的Vmax有较强相关性。10种CYP的CLint均有显著相关性。　　5.5 酶水平、微粒体水平、肝组织水平与肝脏水平　　Spearman相关性分析 10种 CYP的活性在酶水平、微粒体水平、肝组织水平与肝脏水平之间的相关性。在酶水平与微粒体水平之间，除 CYP2C19 与CYP3A5的Vmax在两个水平之间无相关性外（P>0.05），其他CYP的Vmax在两个水平之间均有相关性（P<0.05）。除CYP2A6与CYP2C19的CLint在两个水平之间无相关性外，其他CYP的CLint在两个水平之间均有相关性。在酶水平与肝组织水平之间，除CYP2C9、CYP2C19与CYP3A5的Vmax在两个水平之间无相关性外（P>0.05），其他 CYP的Vmax在两个水平之间均有相关性（P<0.05）。除 CYP2A6、CYP2C19与 CYP3A5的CLint在两个水平之间无相关性外，其他CYP的CLint在两个水平之间均有相关性。在酶水平与肝脏水平之间，除CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19与CYP3A5的Vmax在两个水平之间无相关性外（P>0.05），其他CYP的Vmax在两个水平之间均有相关性（P<0.05）。除CYP2A6与CYP2C19的CLint在两个水平之间无相关性外，其他 CYP的CLint在两个水平之间均有相关性。在微粒体水平与肝组织水平之间以及微粒体水平与肝脏水平之间，所有CYP的Vmax和CLint在两个水平之间均有显著相关性（P<0.05）。在肝组织水平与肝脏水平之间，所有 CYP的Vmax和 CLint在两个水平之间均有很强的相关性（r>0.90，P<0.05）。　　结论　　1.首次提供了正常人肝10种CYP在微粒体水平、肝组织水平和肝脏水平蛋白含量的生理值，各水平均有显著的个体差异。　　2.在微粒体水平，CYP2A6的蛋白含量对其活性的影响较明显；但在任一水平，CYP2B6的蛋白含量对其活性均无影响。