M.suis ENO1和MSG1蛋白分析及单味中药对其mRNA表达的影响

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猪嗜血支原体(Mycoplasmasuis,Msuis)能够引起猪嗜血支原体病,给养猪业造成严重经济损失。本试验分析了M.suis的MSG1(Msuis GAPDH-like protein 1,磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1)和ENO1(Alpha-烯醇化酶,α-enolase,ENO1)黏附蛋白的特性,研究了单味中药对其mRNA表达影响,以揭示单味中药对M.suis黏附作用的影响。根据M.suis ENO1和MSG1基因的参考序列设计引物,对M.suis MSG1和ENO1 mRNA进行反转录、PCR扩增其完整CDS区基因,并进行测序,在线生物信息学分析。用含不同浓度单味中药的培养基对M.suis进行体外培养,通过qRT-PCR技术测定药物作用后M.suis ENO1和MSG1 mRNA的相对表达量,采用Western Blotting技术检测药物作用后两种黏附蛋白MSG1和ENO1的表达情况。结果:(1)ENO1和MSG1蛋白理化性质稳定,均含有疏水区域,均不存在信号肽,均存在二级结构,不存在跨膜结构,说明这两种蛋白分布于M.suis表面;两种蛋白均存在糖基化位点,预测其具备信号传导功能:两种蛋白中均存在磷酸化位点,推测可能与M.suis的自主凋亡周期相关;两种蛋白进化分析表明,M.suis ENO1蛋白与人嗜血支原体中ENO1蛋白亲缘关系最近,MSG1是M.siusi特有的蛋白,与其他物种中的MSG1蛋白亲缘关系较远。(2)qRT-PCR技术检测甘草、黄连、黄芩、丹参、苦参5种单味中药分别在浓度为 2000 μg/mL、4000 μg/mL、6000 μg/mL、8000 μg/mL 时作用于 M.suis 阳性红细胞,ENO1和MSG1 mRNA的相对表达量均显著(P<0.05)下降,其中,黄连的抑制作用极显著(P<0.01),明显高于其他几味中药,黄连的最佳作用浓度为6000 μg/mL。Western Blotting技术检测5种单味中药在6000 μg/mL作用于M.suis ENO1和MSG1蛋白表达水平下降,与M.suis MSG1和ENO1 mRNA的表达水平相符。可见,黄连可有效抑制M.suis ENO1和MSG1的mRNA和蛋白的表达水平。
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