武靴酸纯化及其对α-淀粉酶活性影响研究

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武靴藤为萝蘑科多年生的木本藤蔓植物,又名蛇天角、金刚藤、饭杓藤。分布于越南、印度、以及我国广西、海南等沿海热带地区。武靴藤味苦、性平,具有祛风除湿、凉血消肿、利尿解疟等功效。在印度作为一种传统草药用于治疗“消渴症”,现代研究表明武靴藤具有抑制甜味反应、降低血糖等作用。其主要活性成分是母核为齐墩果烷型的三萜皂苷类化合物武靴酸,但目前对武靴酸的分离多采用传统柱层析法和薄层色谱法,具有分离效率低、过程繁琐等缺点。本文对武靴酸的分离纯化及其对α-淀粉酶的抑制作用进行了系统研究。1.通过萃取、大孔吸附树酯层析法对武靴酸进行了初步的纯化选取60%的乙醇作为溶剂超声回流提取武靴酸,料液比1:10,提取时间1.5h,提取次数2次。合并提取液,旋转蒸发浓缩,依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取,取正丁醇层回收溶剂,用水分散至质量浓度为9.3 mg/mL进行树脂筛选,比较了AB-8、D101、 ADS-7、NKA-9、HPD-100、ADS-17共六种大孔吸附树脂对武靴酸的吸附解析能力。最终选择性能最优的HPD-100树脂进行武靴酸的动态吸附试验并得出最佳工艺条件为:上样浓度5.18mg/mL、上样体积4BV、除杂溶剂10%乙醇、洗脱溶剂70%乙醇,洗脱体积5BV。经HPD-100树脂纯化后得到总皂苷含量为87.75%的武靴酸粗提物。2.高速逆流色谱法(HSCCC)分离武靴酸单体以经HPD-100树脂纯化后的武靴酸粗提物为原料,利用高效液相色谱法(HPLC)筛选出合适K值的溶剂体系,进行高速逆流分离,最终优选出正己烷-正丁醇-甲醇-0.02%三氟乙酸水(0.8:9:1:9)作为武靴酸HSCCC分离的的溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,主机转速1500r/min,柱温:28℃,检测波长235 rim。分离得到的武靴酸Ⅰ经液相色谱检测纯度达90.3%。3.武靴酸对α-淀粉酶的抑制活性研究试验考察了武靴酸、武靴酸Ⅰ对α-淀粉酶的抑制活性,并以阿卡波糖作阳性对照,结果表明武靴酸、武靴酸Ⅰ、阿卡波糖对α-淀粉酶的半抑制浓度(IC50)分别为0.355mg/mL、0.0095 mg/mL、0.465 mg/mL,在试验浓度范围内,武靴酸样品对a-淀粉酶均具有较好的抑制活性。并通过进一步对其抑制机理的研究发现,武靴酸对α-淀粉酶的抑制类型为可逆非竞争型抑制。
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