【摘 要】
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目的1.探究视神经损伤后小胶质细胞介导视网膜神经节细胞损伤的机制;2.探究小胶质细胞Sirt1是否能够减轻视神经损伤后视网膜神经节细胞的损伤;3.探究Sirt1发挥神经保护作用的分子机制。方法1.动物实验本研究选用视神经夹持建立动物视神经损伤模型,使用年龄8周左右C57BL/6成年雄性野生型小鼠与小胶质细胞Raptor特异性缺乏型小鼠进行实验。依据不同组别要求给予小鼠白藜芦醇灌胃或L-亮氨酸腹腔及
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目的1.探究视神经损伤后小胶质细胞介导视网膜神经节细胞损伤的机制;2.探究小胶质细胞Sirt1是否能够减轻视神经损伤后视网膜神经节细胞的损伤;3.探究Sirt1发挥神经保护作用的分子机制。方法1.动物实验本研究选用视神经夹持建立动物视神经损伤模型,使用年龄8周左右C57BL/6成年雄性野生型小鼠与小胶质细胞Raptor特异性缺乏型小鼠进行实验。依据不同组别要求给予小鼠白藜芦醇灌胃或L-亮氨酸腹腔及玻璃体腔注射。使用尼氏体染色检测神经节细胞层细胞数目、免疫荧光染色评估小胶质细胞活化及视网膜内外丛状层突触丢失情况以及共聚焦荧光显微镜检测视网膜内丛状层小胶质细胞对突触的吞噬情况。2.细胞实验（1）采用脂多糖与干扰素γ共同刺激小鼠小胶质细胞系BV2建立体外小胶质细胞炎症模型。依据不同组别要求使用白藜芦醇、雷帕霉素或L-亮氨酸处理BV2细胞。使用实时定量荧光PCR、划痕实验与吞噬实验评估在不同干预处理下BV2细胞的活化水平。（2）使用表达Sirt1或TSC2的质粒转染或者Sirt1特异性抑制剂EX527处理人胚肾293T细胞。使用免疫印迹与免疫沉淀检测Sirt1与TSC2间的相互作用及作用机制。结果1.小鼠内丛状层小胶质细胞于造模后第3天出现小胶质细胞活化及突触丢失,而外丛状层未见明显小胶质细胞激活及突触丢失;造模后第5天节细胞数量出现明显减少并持续性降低;小胶质细胞活化及突触丢失发生先于节细胞数量降低。2.灌胃白藜芦醇激动Sirt1后可抑制小胶质细胞活化、减少内丛状层突触丢失及节细胞死亡以及减弱小胶质细胞对突触的吞噬作用。3.特异性敲除小胶质细胞Raptor而抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1（mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1）活化后可抑制小胶质细胞激活、减少内丛状层突触丢失及节细胞死亡以及减弱小胶质细胞吞噬突触。4.Sirt1与TSC2存在相互作用并且可以去乙酰化TSC2;Sirt1去乙酰化TSC2而降低TSC2磷酸化进而激动TSC2;活化后TSC2对mTOC1抑制作用增强。5.灌胃白藜芦醇同时腹腔注射mTORC1激动剂L-亮氨酸可以逆转白藜芦醇对小胶质细胞活化及吞噬突触的抑制作用以及神经元的保护作用。结论视神经夹持后小胶质细胞激活并吞噬节细胞树突,进而促进节细胞死亡。激动小胶质细胞Sirt1后,其对TSC2去乙酰化作用增强,进而降低TSC2磷酸化水平;TSC2磷酸化水平降低后活性增强,对mTORC1抑制作用增强。Sirt1通过这一信号通路抑制小胶质细胞活化及吞噬节细胞树突,进而产生神经保护作用。
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