【摘 要】
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本文为了研究催化亚基(CNA)调节片段对钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,简称CN)和免疫抑制剂相互作用的影响,表达纯化了本实验现有的CNA及其3个剪切突变体CNAabc(1-456),CNAab(1-388
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本文为了研究催化亚基(CNA)调节片段对钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,简称CN)和免疫抑制剂相互作用的影响,表达纯化了本实验现有的CNA及其3个剪切突变体CNAabc(1-456),CNAab(1-388),CNAa(1-347),结果发现:随着调节区段的剪切,酶的Km值逐渐增大,Vmax也逐渐增大;此外,如果比较四种酶的基础活力可以发现,酶的基础活性在以DNPP和RII为底物时都有明显增加,CNa的基础活性要比CNA的高出数百倍。然后进一步比较免疫抑制剂一亲免蛋白对它们的抑制,结果发现: BBH为必需,缺失了该区的突变体CNAa不再受抑制;CBD对于免疫抑制剂一亲免蛋白的抑制无影响;AID则会减弱免疫抑制剂一亲免蛋白的抑制作用。
通过CaM融合表达后酶切的方法表达纯化了CNA的C末段系列剪切片段:Ci511(389—511),Ci482(389—482),Ci456(389—456),Ci413(389—413),并合成了AID(457—482)片段。通过比较这些片段对于CNAab与CNAa的抑制作用,结果表明:除经典的AID区域外,CBD区域对酶活也存在自抑制作用;Ci413的抑制与BBH(347—388)相关而AID的抑制则不需要BBH的存在;以RII为底物时对CNAab,Ci413为典型的非竞争性抑制而AID为典型的竞争型抑制。
综上所述,BBH区域对外源抑制剂的作用和内源调节片段的抑制都是必需的,除了经典的AID区域外,CBD区域对酶活也有抑制作用,而且以RII为底物时对CNA388,Ci413为典型的非竞争性抑制而AID为典型的竞争型抑制。
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