邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)被广泛应用于工业生产和塑料制品中，普遍存在于环境中，对人和动物都有致畸、致癌和致突变的作用，并具有较强的内分泌干扰性，已经受到了越来越多的关注。近年来，大量的研究都是使用鼠类模型来研究单一的DBP或DEHP的“三致”效应，生殖毒性和发育毒性等。而很少将两者联合并且使用斑马鱼为实验模型，在斑马鱼中的行为毒性和生殖毒性还未见有报道。　　 目的：　　 研究DBP和DEHP对斑马鱼生长发育和精子活力的影响。　　 方法：　　 1．斑马鱼胚胎的收集与挑选　　 前一天20:00将雌雄鱼按6:6进行配对，放入全封闭循环孵化系统内，笠日8:00灯亮后0.5h开始收集。胚胎收集完，经清洗、挑选后移入斑马鱼胚胎培养液中，于28℃光照培养箱中以14L:10D光周期培养待用。　　 2．DBP和DEHP在斑马鱼胚胎中的毒性效应　　 在预实验的基础上，在0％-100％的致死剂量范围内设立6个浓度组(1、5、8、10、15和20μM/L)，吐温-80和胚胎培养液(EM)为对照组，选用96孔板细胞培养板进行实验，每孔加一枚胚胎和200μL溶液，每天早上9:00用显微镜直接观察96孔板中的胚胎发育状态，连续观察6天。　　 3．DBP对胚胎不同染毒时间段的窗口效应　　 DBP96hpf-LC50为9.19μM/L的基础上，设置4组比它高的浓度(10、12、15和20μM/L)，选用六孔板来进行实验，每孔10枚胚胎和加5ml溶液，EM为对照，以10h间隔(4-14hpf、14-24hpf、24-34hpf)对胚胎进行窗口染毒，观察胚胎对DBP的哪个时间段哪个浓度最敏感。　　 4．细胞凋亡　　 各浓度组随机挑选12枚正常的胚胎至6孔板中。染毒18h(6hpf-24hpf)后，将胚胎放在有0.5mg/mL蛋白酶E溶液的培养皿中，在室温下放置8分钟。脱膜后的胚胎用5μg/mL吖啶橙溶液在暗室中染色1h，然后用0.04mg/mL的MS222麻醉5min，置载玻片上于荧光显微镜下镜检拍照。　　 5．行为学光刺激的研究　　 120hpf的幼鱼于0、1和5μM/LDBP染毒1h，来检测DBP对斑马鱼幼鱼行为的影响。用24孔板来进行染毒实验，每孔一条幼鱼，2ml溶液，每组60条幼鱼。染毒1h后，用斑马鱼行为分析系统检测。　　 6．精子活力的测定　　 DBP96hpf-LC50为9.19μM/L，从而得出安全浓度大约为0.92μM/L，在此基础上，等对数浓度差设置3个质量浓度0.41、0.92和2.06μM/LDBP。300μM/LDEHP与以上3个DBP浓度分别联合染毒，进行20天慢性毒性实验。染毒结束后精子采集激活后，用计算机辅助精子分析仪测定，分析各组活力参数和运动参数。　　 结果：　　 通过研究，我们确定了DBP和DEHP对斑马鱼生长发育和精子活力有影响。毒性效应表明，DBP延迟了斑马鱼胚胎孵化的时间，并且随着浓度和染毒时间的延长，斑马鱼胚胎-幼鱼的畸形率和死亡率显著上升，主要的致畸效应是脊柱弯曲和囊肿。窗口实验证明，20μM/LDBP染毒组在14-24hpf时间段观察到最高的是卵黄和心包囊肿畸形，并且观察到各组胚胎在脱毒后，有些非致死性畸形在24小时内恢复正常。在行为学研究中，发现DBP对斑马鱼的行为有明显的抑制作用。细胞凋亡实验发现，浓度组中的细胞凋亡数目明显多于对照组，且多集中于心包区、眼部和尾部，与畸形率发现较高的部位相一致。对成年雄性斑马鱼精子活力的研究中，发现DBP和DEHP单独染毒组中，精子总活力(TM)和快速运动精子活力(PM)与对照组和溶剂组比较均有显著性差异(p＜0.05)。各染毒组中，随着染毒溶液浓度越大，TM降低越显著(p＜0.05)，存在剂量-效应关系。运动速度(VAP、VCL、VSL)、体重、体长和精巢重除复合染毒组（0.92μM/LDBP和300μM/LDEHP）有显著降低(p＜0.05)外，其他染毒组组均无明显差异。此外，我们发现，高浓度复合染毒组与其单独的染毒组比较，DBP和DEHP对精子活力的影响有协同降低作用。　　 结论：　　 DBP短期染毒对斑马鱼胚胎幼鱼的生长发育有影响，延迟孵化率，使畸形率和死亡率上升。虽然浓度高达300μM/L的DEHP对斑马鱼的生长发鱼没有显著的影响，但在细胞凋亡研究中还是观察到较多的细胞凋亡。DBP和DEHP以及联合20天染毒对成年雄性斑马鱼的精子活力有明显的抑制作用，而且进一步确认TM或PM可以作为生物指标来研究成年雄性斑马鱼的雌激素效应。