背景食管癌是常见的恶性肿瘤,高发地区发病率约为0.05%,其中食管鳞状细胞癌占90%。性别决定区Y框蛋白1（Sex determining region Y-box 1,SOX1）属于高迁移率族蛋白DNA结构域转录因子,在多种肿瘤中的表达受到抑制。已有研究表明,SOX1基因在食管鳞癌组织中的表达显著降低,与肿瘤浸润深度、进展分期和淋巴结转移数目等预后不良指标显著相关;且其启动子区域的Cp G位点呈现高甲基化状态。近年来甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的联合应用成为肿瘤生物学治疗的研究热点。因此,本论文拟采用甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠（NaBu）联合应用研究其对食管癌细胞系增殖、凋亡等的作用及对SOX1表达的影响。结果为深入研究SOX1基因表达调控在食管癌发生发展中的分子机制,寻找特异的食管癌肿瘤生物标志物奠定实验和理论基础。目的1.甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR和组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBu联合处理对食管癌细胞Eca109和EC9706增殖、凋亡及细胞周期等细胞生物学特性的影响;2.5-Aza-CdR和NaBu联合处理对食管癌细胞Eca109和EC9706中SOX1基因表达的影响。方法1.5-Aza-CdR和NaBu对食管癌细胞增殖的影响。实验采用两种食管癌细胞株Eca109和EC9706,设为八个实验组:三个5-Aza-CdR浓度组（2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L）,三个NaBu浓度组（l.0 mmol/L、2.5 mmol/L、5 mmol/L）,联合用药组（10μmol/L 5-Aza-CdR+2.5mmol/L NaBu）,以及对照组。各实验组食管癌细胞加药处理后正常培养48 h,MTT法检测5-Aza-CdR和NaBu单用、联合应用对肿瘤细胞增殖的抑制率。2.5-Aza-CdR和NaBu对食管癌细胞凋亡及周期的影响。实验分组如下:10μmol/L5-Aza-CdR组、2.5 mmol/L NaBu组、10μmol/L 5-Aza-CdR+2.5 mmol/L NaBu、食管癌细胞对照组。各实验组食管癌细胞加药处理后正常培养48 h,应用Annexin V/PI双染色法和流式细胞分析法,检测分析5-Aza-CdR和NaBu单用、联合应用对Eca109和EC9706细胞凋亡率及周期分布影响。3.5-Aza-CdR和NaBu对食管癌细胞SOX1基因的表达影响。收集上述2的各实验组食管癌细胞,分别提取总RNA反转录为c DNA并进行实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测,采用2-△△Ct法分析SOX1基因m RNA相对表达水平;分别提取各实验组食管癌细胞的总蛋白质进行Western blot实验,检测分析SOX1的蛋白表达变化。结果1.MTT检测结果显示:5-Aza-CdR和NaBu处理后,食管癌细胞株EC9706和Eca109的生长明显受到抑制,其作用具有时间和剂量依赖性。在相同的时间点及药物剂量条件下,两种药物联合应用组对食管癌细胞的抑制率相对于单一用药组更明显（P<0.05）。2.流式细胞术检测表明:相对于空白对照组,5-Aza-CdR和NaBu作用细胞48 h后,EC9706和Eca109两种食管癌细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;联合用药组凋亡率明显强于单用药组（P<0.05）。细胞周期分析结果表明,处于对数生长期的对照组食管癌细胞株主要分布于G0/G1期和S期,G2/M期相对较低。单独用NaBu处理细胞48 h后,G0/G1期细胞明显增加;大部分细胞阻滞在G0/G1期;单独应用5-Aza-CdR处理细胞48 h后,处于S期的细胞明显增多,细胞周期多数阻滞在S期;联合用药组G0/G1期阻滞相对于对照组最为显著（P<0.05）。3.qRT-PCR结果显示,与对照组细胞相比,单独用5-Aza-CdR或联合用药组作用EC9706和Eca109细胞48 h后SOX1的m RNA表达增加（P<0.05）。Western Blot结果表明5-Aza-CdR或联合用药组促进了SOX1蛋白的表达。结论1.5-Aza-CdR和NaBu及二者的联合应用均能显著抑制人食管癌细胞的增殖,其抑制作用可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。2.5-Aza-CdR及其与NaBu的联合应用可上调食管癌细胞SOX1基因m RNA和蛋白的表达。