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目的本实验采用不同的葡萄糖浓度的培养液以及甘露醇培养液孵育人单核巨噬细胞,观察在不同的环境中单核巨噬细胞表达MMP-9的不同,探讨不同的葡萄糖浓度及糖浓度波动对单核巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响以及渗透压改变是否参与了这一过程。旨在探讨高糖及糖波动促发糖尿病大血管病变的作用机制,为糖尿病大血管并发症的治疗提供新的方向及理论依据。方法1.THP-1细胞的培养：于-80℃冰箱中取出THP-1细胞株,在超净工作台内解冻复苏后接种于培养瓶中,置于5%CO2培养箱中孵育(37℃)。培养的单核细胞采用胎盘蓝染色法计算细胞活率。2.单核巨噬细胞的获得：THP-1细胞在培养至浓度为105/ml时经乙酸肉豆蔻佛波酯(P M A)孵育48后被诱导成单核巨噬细胞。3.单核巨噬细胞的鉴定：采用鸡红细胞吞噬法对单核巨噬细胞进行功能鉴定。4.实验分组：根据葡萄糖浓度及其变化分为对照组(5mmol/L)、高葡萄糖组(15mmol/L)、葡萄糖浓度波动组(5-15mmol/L)及渗透压控制组(甘露醇浓度5-15mmol/L)。5.MMP-9的检测：RT-PCR测定各组MMP-9 mRNA的表达,并比较各组间有无统计学差异。结果1.高糖组、糖波动组及甘露醇组单核巨噬细胞内MMP-9的表达均明显高于对照组(P<0.01);2.糖波动组MMP-9的表达明显高于高糖组[(0.897±0.030 vs0.627±0.041),(P<0.01)];3.渗透压控制组MMP-9表达介于高葡萄糖组与葡萄糖浓度波动组之间,与高葡萄糖组、葡萄糖浓度波动组比较有统计学意义[(0.823±0.036vs0.627±0.041),(0.823±0.036 vs 0.897±0.030)(P<0.01)]。结论1.高葡萄糖浓度较低葡萄糖促进单核巨噬细胞内MMP-9的表达；2.糖浓度波动的环境较高葡萄糖更能促进单核巨噬细胞内MMP-9的表达;3.糖浓度波动对单核巨噬细胞的影响部分与渗透压改变有关。