论文部分内容阅读
背景和目的目前各个国家对于复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)的界定并不统一。美国生殖医学学会(American Society for Reproductive Medicine)定义为2次或2次以上流产;我国2016年中华医学会妇产科分会产科学组(Department of Obstetrics and gynecology of Chinese Medical Association)将 RSA的诊断标准讨论后设定为发生3次及以上的流产。其中流产(abortion,miscarriage)指在胚胎或胎儿尚未具有生存能力而妊娠终止。各个国家和地区对流产时妊娠周数定义也并不相同。我国目前将妊娠未达28周、胎儿体重不足1000g妊娠终止,称为流产。若流产发生在妊娠12周前,称为早期流产,发生在妊娠12周到28周,称为晚期流产。胚胎着床后发生自然流产者达31%,而这其中80%为早期流产,在早期流产中,又有约2/3为隐性流产(clinically silent miscarriage),也就是发生在月经期前的流产,临床习惯称为生化妊娠(chemical pregnancy)。虽然复发性流产目前定义为连续3次或3次以上的自然流产,但绝大多数专家认为连续发生2次自然流产即应重视并评估患者,因为其再次发生自然流产的风险与发生3次的患者非常接近。结合目前国内外关于RSA的定义和研究,本课题选取的研究对象为与同一性伴侣连续发生2次及以上早期自然流产的患者。RSA的病因十分复杂,主要包括遗传因素(胚胎或夫妇染色体异常)、解剖因素(宫颈机能不全、先天性子宫发育异常、子宫病变等)、内分泌因素(黄体功能下降、PCOS、糖尿病、甲状腺疾病、高泌催乳素血症等)、感染(衣原体、支原体、弓形虫、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒和人微小病毒B19等)、免疫因素(自身免疫型和同种免疫型)、血栓前状态(先天性和获得性)、其他因素(不良环境、不良心理、吸烟、酗酒等)。然而有超过一半的RSA原因不明,这部分被定义为不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)[1]。本课题通过对URSA患者的早孕期绒毛进行收集,建立了外植体培养模型。本研究对URSA患者流产绒毛组织和正常妊娠行人工流产的患者的绒毛组织进行外植体培养,旨在探讨低分子肝素(low-molecular weight heparin,LMWH)和羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)对绒毛外植体生长的影响,并研究其对URSA患者的应用价值和对再次妊娠的指导意义[2]。研究方法本研究纳入6例于2018年9月至2019年3月期间于山东省妇幼保健院就诊行人工流产的URSA患者,将其设定为病例组,另选6例同孕龄的行人工流产的正常妊娠患者,设定为正常对照组,收集两组流产绒毛组织。本研究将病例组胚胎绒毛分为三组,成功培养成外植体后,根据培养基加药不同分为空白对照组、HCQ组和LMWH组。其中加药处理组根据药物浓度不同分为低剂量组、治疗剂量组和高剂量组,LMWH的浓度设定为0.25、2.5和25U/ml,HCQ的浓度为1、10和50ug/ml,另外一组加用不含有药物的培养基,设定为空白对照组,在种植时(0h)及种植后72h后分别对绒毛外植体进行观察和拍摄,观察绒毛外生性游出和迁徙距离情况。ImageJ分析外植体的迁移距离,SPSS 20.0统计分析所得数据,以均数±标准差(x±s)表示计算结果,进行方差检验后,根据结果,自身前后对照使用配对样本的t检验,采用成组t检验分析两独立样本,设定P<0.05为有统计学意义。统计正常对照组、空白对照组、药物处理组不同药物之间、同种药物不同药物剂量之间外植体的迁移距离是否存在统计学差异。研究结果正常对照组绒毛外植体迁徙距离为(333.38±112.89)μ m,病例组空白对照组绒毛外植体外生性迁徙距离为(73.10±21.28)μm,HCQ低剂量组(1μg/ml)迁徙距离为(125.37±34.66)μm,治疗剂量组(10 μg/ml)迁徙距离为(235.00±89.46)μm,高剂量组(50 μ g/ml)迁徙距离为(135.25±42.05)μm,LMWH低剂量组(0.25U/ml)迁徙距离为(110.19±18.32)μm,治疗剂量组(2.5U/ml)迁徙距离为(216.33±85.11)μm,高剂量组(25U/ml)迁徙距离为(109.99±18.33)μm。1.正常对照组培养72h后外植体迁徙距离大于URSA空白对照组72h后外植体的迁移距离,二者存在统计学差异(P<0.01)。2.URSA患者胚胎绒毛外植体HCQ及LMWH治疗剂量干预组外植体外生性迁移距离大于空白对照组外植体的迁徙距离,二者差异有统计学差异(P<0.05)。3.HCQ、LMWH治疗剂量下绒毛外植体的迁移距离分别较低剂量组、高剂量组外植体的迁徙距离长,均存在统计学差异(P<0.05)。4.URSA绒毛外植体经治疗剂量的HCQ处理72h后外植体迁移距离与正常对照组相比无统计学差异,LMWH处理72h后与正常对照组相比有统计学意义,两种药物处理组间迁徙距离无明显统计学差异。研究结论1.与正常绒毛相比,URSA患者胚胎绒毛外植体外生性迁移距离短,迁移能力欠佳。2.HCQ及LMWH治疗剂量下可以改善URSA患者绒毛迁移能力不足的情况,但较正常妊娠患者绒毛迁移能力仍存在差距。3.HCQ及LMWH治疗剂量对URSA患者的绒毛外生性生长的改善作用优于高剂量及低剂量组。