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目的:检测人肺腺癌细胞SPCA-1、大细胞癌NCI-H460、小细胞癌NCI-H446三种细胞,在TopoⅡα抑制剂依托泊苷作用下TopoⅡα蛋白和核酸水平的表达情况及三种细胞对顺铂、阿霉素细胞生存率的变化,进而研究TopoⅡα的表达与肺癌化疗耐药的相关性。
方法:将一定密度、生长状态良好的(取对数生长期的有活力的)SPCA-1、NCI-H460、NCI-H446肺癌细胞,分别随机分为实验组和对照组,采用RT-PCR的方法检测各组细胞中TopoⅡα的核酸表达水平,并利用Western Blotting及免疫荧光细胞化学的实验方法检测各组细胞中TopoⅡα的蛋白表达水平,进一步通过MTT的方法,分别检测实验组和对照组三种细胞,在顺铂、阿霉素分别作用下的细胞生存率,并计算出细胞半数致死药物浓度IC50。采用SPSS16.0统计软件对数据进行统计分析。
结果:1.RT-PCR.检测结果显示:NCI-H460、NCI-H446两种细胞实验组核酸表达均明显弱于对照组,且具有统计学差异(P＜0.05),SPCA-1细胞实验组和对照组核酸表达并无统计学差异(P＞0.05)。2.WesternBlotting法检测结果显示:SPCA-1、NCI-H460、NCI-H446三种细胞实验组较对照组蛋白表达明显减弱并具有统计学差异(P＜0.05),对照组三种细胞TopoⅡα蛋白的表达无统计学差异(P＞0.05)。3.免疫荧光细胞化学方法检测结果:SPCA-1细胞实验组的荧光强度与依托泊苷具有一定的浓度依赖关系,随着依托泊苷浓度逐渐增高荧光强度逐渐减弱,在依托泊苷浓度为10μmol/L时荧光强度减弱最明显；NCI-H460、NCI-H446细胞实验组较对照组荧光强度轻度减弱。4.MTT法检测细胞生存率结果显示:对照组SPCA-1及NCI-H446细胞较NCI-H460细胞对顺铂更加敏感(P＜0.05)；SPCA-1及NCI-H1460细胞的顺铂IC50实验组明显低于对照组(P＜0.05)。NCI-H446细胞实验组较对照组对顺铂的敏感性未见统计学差别(P＞0.05)。对照组,NCI-H446细胞较SPCA-1及NCI-H460细胞对阿霉素更加敏感(P＜0.05)。实验组与对照组相比,三种细胞对阿霉素的敏感性未见明显差别(P＞0.05)。
结论:本研究表明依托泊苷可以抑制NCI-H460、NCI-H446细胞TopoⅡα核酸的表达；同时可以抑制SPCA-1、NCI-H460、NCI-H446细胞TopoⅡα的蛋白表达。SPCA-1及NCI-H460细胞在依托泊苷的作用下,对顺铂的化疗敏感性增强。通过降低TopoⅡα的蛋白表达,可以提高SPCA-1、NCI-H460细胞对顺铂的化疗敏感性。同时提示不同类型的肺癌细胞对不同化疗药物的敏感性不同。因此选用适当的方法,针对耐药蛋白在不同肺癌细胞类型中的不同特点,在核酸或者蛋白水平进行干预,来提高肿瘤化疗的敏感性,将可能为我们攻克肺癌化疗耐药提供了一个新的思路。