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目的:急性有机磷农药中毒(AOPP)是全球最常见的农药中毒,特别是发展中国家,是青壮年常见意外死亡因素之一,不同国家和地区报道的病死率从4-30%不等,我国的救治病死率平均为10%,远远高于国外。有机磷农药(OPs)中毒的主要机理是有机磷农药与乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,简称AChE)结合后,形成磷酰化胆碱酯酶,使之失去水解乙酰胆碱的能力,从而出现胆碱能神经过度兴奋等中毒症状。临床中毒表现主要与神经突触和神经肌肉接头处(NMJ)乙酰胆碱酯酶受抑有关,该部位乙酰胆碱酯酶受抑程度能够反映中毒程度。由于受技术条件的限制,该部位胆碱酯酶活性难以直接测得。急性有机磷农药中毒的经典实验室指标是全血胆碱酯酶活力(包含红细胞内乙酰胆碱酯酶活力和血清内丁酰胆碱酯酶活力),根据其下降程度作为有机磷农药中毒的诊断和中毒程度分级的依据。目前,血清丁酰胆碱酯酶(BuChE)活性测定已在临床广泛开展,但其在有机磷农药中毒中的诊断意义尚在探讨之中。临床尚未见将全血胆碱酯酶活力与血浆(血清)胆碱酯酶活力进行同步系统比较的研究,该研究对临床已明确诊断AOPP并根据临床表现进行中毒分级的病人同步测定全血及血清胆碱酯酶活力,以期能对血清胆碱酯酶活力测定的临床意义进行客观评价,为临床诊断、治疗提供依据。
方法:我们对不同中毒程度的急性有机磷农药中毒患者进行了同步化比较研究,选择2006年10月至2007年12月河北医科大学第二医院急诊科接诊AOPP患者92例,并将资料不完整者12例(方法不合乎规范,就诊偏晚,监测数据不连贯等)予以剔除,80例AOPP患者均为消化道吸收中毒,服毒后8小时内就诊,其中男36例,女44例,年龄14-79岁,平均34.4±14.8岁。其中,敌敌畏中毒22例,甲胺磷中毒22例,氧化乐果中毒19例,辛硫磷中毒9例,乐果中毒4例,甲拌磷中毒3例,马拉硫磷中毒1例。诊断标准按卫生部制定《有机磷中毒诊断标准与处理原则》进行诊断。本组病例均有明确服毒史并经血液毒物分析证实存在有机磷农药成分,出现不同程度的毒蕈碱样、烟碱样及中枢神经系统症状,根据临床表现诊断为轻度中毒(仅出现毒蕈碱样症状)10例、中度中毒(出现毒蕈碱样和烟碱样症状)20例,及重度中毒(在中度中毒基础上均出现了呼吸衰竭)50例。测定血清胆碱酯酶活力,同步观察试纸比色法测定全血胆碱酯酶活力的变化,比较两者相关程度以及与临床表现的关系,探讨血清胆碱酯酶活力测定在有机磷中毒救治中的意义和地位。
本组实验选择分别测定全血AChE和血清BuChE,其具体方法如下。
全血AChE的测定:取指示剂溴麝香草酚蓝(BTB)试纸片一张,放在带凹槽的血样载片上,先将患者指尖或耳垂消毒针刺,擦去第一滴指血,然后将第二滴血直接蘸放在试纸中央,血斑直径约7-9毫米,将平板血样载片盖上并下压固定,放在患者腰间(如患者体温异常则放在家属腰间),20min后将血样放在测定盒光室上1/3的透光比色处,与盒内标准比色板对比,根据相同色斑的活性指数,观察血斑颜色最红处,判断胆碱酯酶活性。判断由受过训练的3名医师进行,取其平均值。试纸避光、防潮保存,禁酸碱,开启超过6小时不再应用,光源变弱时及时更换电池,酸碱失衡未纠正的病人不用此法。 BuChE测定: AOPP组患者在抢救用药同时分别于急诊就诊即刻、第2、3、4、5、6、7、8天、出院前一天,每日晨8时抽静脉血2 m1,注入含有促凝剂+分离胶的真空采集管(中日合资积水创格公司提供),留置半小时后离心取血清。应用美国强生公司ARCHITECT ci8200型全自动免疫生化分析仪测定,采用强生公司配套试剂,为北京市中生北控生物科技股份有限公司生产,所用的底物为丁酰硫代胆碱。
中毒临床表现采用“中毒指数”量化评估,中毒指数为以下各分值的总合;①胆碱能兴奋症状4分(腺体分泌1分,如流泪、流涕、流涎、大汗、口吐白沫等;平滑肌痉挛1分,如瞳孔缩小、视力模糊、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、尿频、大小便失禁等;肺水肿2分,表现咳嗽、气短、胸闷、呼吸困难、紫绀、双肺湿罗音等)。②肌纤维颤动或肌无力3分,可发生在小肌群,如眼睑、面部、舌肌,以及四肢及躯干肌肉,或强直性痉挛,全身紧缩和压迫感。和(或)临床表现有肌力减退,颈肌无力抬头受限、四肢肌反射减弱或消失等,有机磷中毒致昏迷无自主运动者计为3分。③周围性呼吸肌麻痹3分,指需机械辅助通气者。④排除药物影响如阿托品中毒等,由AOPP导致的意识不清3分,。于就诊一小时内完成中毒指数计算,所计分值为就诊当日所有症征的最高分值合计。以后每日末梢血测胆碱酯酶活力时同一时间点进行评分总结。结果:急性有机磷农药中毒后,无论是轻度、中度、重度中毒,全血AChE和血清BuChE活性在中毒8小时内均明显降低,与正常对照组比较有统计学意义(轻度组P<0.01;中度组P<0.001;重度组P<0.001),不同中毒程度组之间比较也有显著性差异。血清BuChE活性与中毒指数呈显著负相关(γ=-0.922),有统计学意义(P<0.01)。全血AChE活性与中毒指数呈显著负相关(γ=-0.913),有统计学意义(P<0.01)。AChE和BuChE的活性变化趋势基本是平行的,两酶之间总的相关性好(γ=0.906),均与临床表现(中毒指数)相关,能够较好地反映有机磷农药中毒的程度。
结论:急性口服OPs中毒早期,血清BuChE活力的测定,可以作为有机磷农药中毒诊断的灵敏实验室指标,不同中毒程度之间血清BuChE活力明显不同,血清BuChE恢复基本与临床表现的严重程度平行,作为中毒分级指标,其取值范围有待探讨,不能按传统全血AChE下降程度分级办法套用。无论是血清BuChE活力测定,还是试纸比色法测定全血AChE活力(实为全血胆碱酯酶活力)测定,均有其局限性。