论文部分内容阅读
目的：明确医用臭氧（O3）对福尔马林炎性疼痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞增殖活化以及TNF-α、IL-1β、MCP-1释放的影响，探讨医用臭氧参与炎性疼痛可能的机制。 方法：本实验包括两部分内容：第一部分：成年雄性SD大鼠48只，体重220±20 g，随机分为空白对照组（C组）和炎性痛组（F组）（每组n=24）。C组：大鼠右后肢足掌部皮下注射生理盐水100μl；F组：大鼠右后肢足掌部皮下注射2％福尔马林100μl，建立福尔马林炎性痛模型。建模前（0h）以及建模后（1h、3h、12h、1d、3d和5 d）观察大鼠疼痛行为学变化，并进行热痛缩足反射阈值(thermal withdrawal latency， TWL)和机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold，MWT)的测定,行为学实验结束后，取各组建模前和建模后1h、1d、5d大鼠脊髓腰膨大部进行免疫组化，测定脊髓星形胶质细胞特异性标记物神经胶质纤维酸性蛋白（ Glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表达情况，并取大鼠右后肢足掌部注射部位皮下组织进行病理HE染色，检测福尔马林炎性疼痛大鼠足底组织病理改变。第二部分：成年雄性SD大鼠40只随机分为四组（每组n=10）:空白组（C组）：不做任何处理；炎性痛组（F组）：建立炎性疼痛模型后，鞘内注射生理盐水10μl；氟代柠檬酸组（F+FC组）：建立炎性疼痛模型后，鞘内注射氟代柠檬酸10μl（0.1M）；臭氧组（F+O3组）：建立炎性疼痛模型后，大鼠右后肢足掌部皮下红肿处注射医用臭氧50μl(30μg/ml)；各组于建模前（0h）以及建模后（1h、3h、12h、1d、3d和5d）观察大鼠疼痛行为学变化，并进行TWL和MWT值的测定，于建模后1 d取大鼠脊髓，应用Western blot测定GFAP的表达水平，应用ELISA检测MCP-1、TNF-α、IL-1β的表达量。 结果：第一部分：行为学结果：C组和F组大鼠TWL和MWT基础值比较差异无统计学意义（P＞0.05），与C组比较，F组1h时间点TWL和MWT显著下降(P＜0.05)，3 h、12 h、1 d、3 d、5 d时MWT和TWL逐渐升高。免疫组化结果：与C组相比，建模后各时间点F组GFAP的表达显著增加(P＜0.05)，表现为细胞数量增多，体积增大，GFAP染色增强；HE染色结果：与C组比较，F组建模后各时间点大鼠右后肢足掌皮下组织可见大量炎性细胞浸润，真皮组织排列紊乱，纤维分布疏松。第二部分：C组、F组、F+FC组、F+O3组4组大鼠TWL和MWT基础值比较差异无统计学意义（P＞0.05），与C组比较，F组建模后1 hTWL和MWT显著下降(P＜0.05)；与F组比较，F+FC组及F+O3组TWL和MWT增高（P＜0.05)；Western blot结果显示：与C组相比，F组GFAP的表达的表达显著增加（P＜0.05）；与F组相比，、F+O3组和F+FC组GFAP的表达降低（P＜0.05）；ELISA结果显示：与C组比较，F组大鼠脊髓TNF-α、IL-1β和MCP-1表达上调（P＜0.05）；与F组比较，F+FC组、F+O3组大鼠脊髓TNF-α、IL-1β和MCP-1表达下调(P＜0.05)，F+FC组与、F+O3组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论：星形胶质细胞在福尔马林炎性疼痛的维持中起重要作用。医用臭氧能抑制福尔马林炎性疼痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞增殖活化，能显著改善炎性疼痛，其机制可能与抑制脊髓炎性因子释放有关。