【摘 要】
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牛传染性鼻气管炎（IBR）和牛病毒性腹泻/黏膜病（BVD/MD）是牛群中常见的两种病毒性传染病,在临床上BVD和IBR常混合感染,防控这两种传染病主要是通过疫苗免疫,但国内尚无商品化疫苗。因此,急需研制一种同时预防BVD和IBR的安全有效疫苗。为筛选IBR-BVD二联灭活疫苗的候选毒株,对IBRV DQ-1株和BVDV HJ-1株分别进行理化性质的研究,包括酸、胰酶、乙醚和氯仿敏感性,耐热性,Mg
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牛传染性鼻气管炎（IBR）和牛病毒性腹泻/黏膜病（BVD/MD）是牛群中常见的两种病毒性传染病,在临床上BVD和IBR常混合感染,防控这两种传染病主要是通过疫苗免疫,但国内尚无商品化疫苗。因此,急需研制一种同时预防BVD和IBR的安全有效疫苗。为筛选IBR-BVD二联灭活疫苗的候选毒株,对IBRV DQ-1株和BVDV HJ-1株分别进行理化性质的研究,包括酸、胰酶、乙醚和氯仿敏感性,耐热性,Mg2+保护性等。为获得两种病毒增殖工艺分别进行培养基、血清含量、接毒方法、接毒剂量、收毒时间和冻融次数等条件进行筛选。为制备二联灭活疫苗将两种病毒用甲醛灭活,优化甲醛浓度、灭活时间和灭活温度,选用Montanide ISA 206佐剂和白油佐剂,根据不同病毒滴度和佐剂进行乳化制备了8种灭活疫苗,将所制备疫苗按照《中国兽药典》要求进行检验。为评价疫苗免疫效果,进行了本动物免疫试验,将54头18月～30月龄怀+孕奶牛随机分成14组进行免疫试验,首次免疫后21 d二免,每日记录临床症状。于免疫0 d、7d、14 d和21d,二免后7 d、39 d和99 d对试验牛尾静脉采血分离血清,采用病毒中和试验检测中和抗体效价。结果显示,两种病毒均对乙醚、氯仿和胰酶敏感,对酸的抵抗力较弱,均不耐热,Mg2+对两种病毒不具有保护力。两种病毒最佳培养基均为DMEM;生长液最佳血清含量均为8%;维持液最佳血清含量均为0%;最佳冻融次数均为2次;IBRV最佳接毒量为0.02 MOI,BVDV为0.04 MOI;IBRV最佳接毒方法为同步法,BVDV为感作法;最佳收毒时间IBRV为80%CPE,BVDV为70%CPE。IBRV最佳灭活条件为甲醛终浓度0.25%,37℃空气摇床（100 r/min）中作用12 h,BVDV为甲醛终浓度0.2%,37℃空气摇床（100 r/min）中作用4h。制备的8种灭活疫苗均符合《中国兽药典》相关要求。各组疫苗免疫牛一免后未见异常症状。二免后,IBR(107.5TCID50/0.1mL)-BVD(106.2TCID50/0.1mL)白油佐剂二联灭活疫苗组奶牛体温升高,最高达到41.5℃,二免4 d后体温恢复正常,其它组均正常。BVD(105.2TCID50/0.1mL)疫苗组未产生抗体,其它各组疫苗均能诱导奶牛产生中和抗体,各组均在二免后39 d出现峰值,IBR(107.5TCID50/0.1mL)206佐剂4 mL灭活疫苗组为1∶98.5,BVD(106.2TCID50/0.1mL)206佐剂4 mL灭活疫苗组为1∶78.7,二免99 d后仍能产生一定中和抗体。IBRV和BVDV中和抗体效价随着免疫剂量增加而升高,高剂量组（4mL/头）对实验动物具较好安全性,各组疫苗免疫怀孕奶牛后均未出现流产。筛选出IBR(107.5TCID50/0.1mL)-BVD(106.2TCID50/0.1mL)206佐剂二联灭活疫苗组。制备灭活疫苗安全性较好并能够产生一定的中和抗体效价,为下一步攻毒试验奠定基础。
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