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【目的】应用基因工程技术构建含靶基因血管内皮生长因子(VEGF)的pcDNA3.1(+/-)重组质粒,通过其转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,并运用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附反应(ELISA)和MTT对转染前后各组细胞的生物学行为进行检测,以探讨正、反义血管内皮生长因子基因对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖行为的影响。【方法】采用组织块法获取人增生性瘢痕成纤维细胞,行鼠抗人细胞角蛋白(CK7)和波形蛋白(V9)细胞免疫化学进行鉴定。构建靶向VEGF基因pcDNA3.1(+) /hVEGF165(正义组)、pcDNA3.1(-)/hVEGF165(反义组)和空质粒pcDNA3.1(+)(空载体组)转染人成纤维细胞,以及未行转染处理的人成纤维细胞(对照组),共设为4组。经G418筛选获得阳性转染细胞克隆。采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)显示VEGF基因在细胞内的表达,上清行酶联免疫吸附反应(ELISA)检测VEGF蛋白表达水平,MTT测定细胞体外生长情况。【结果】(1)组织块法成功获取人增生性瘢痕成纤维细胞,并行CK7和V9细胞免疫化学鉴定,成纤维细胞纯度达90%以上。(2)经酶切鉴定及测序证实,正、反义VEGF基因表达载体pcDNA3.1(+)/hVEGF165和pcDNA3.1(-)/hVEGF165构建成功。(3)G418筛选成纤维细胞的最佳浓度为200μg/mL,50μg/mL为细胞扩增浓度。(4)正、反义VEGF及空载体pcDNA3.1(+)经脂质体介导均成功转染至人增生性瘢痕成纤维细胞中,G418筛选培养其抗性克隆,并大量扩增备后续实验使用。(5)RT-PCR与ELISA检测显示：正义组VEGF mRNA与对照组比较,表达明显增强,反义组表达显著减弱,空载体组表达无明显差异。VEGF蛋白表达水平结果显示,与对照组相比,正义组VEGF表达明显增加(P<0.05),反义组VEGF表达显著降低(P<0.05),空载体组表达无明显变化(P>0.05)。(6)MTT结果显示,细胞在正常培养条件下4组细胞体外生长曲线无明显差异。【结论】(1)体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞对外源性VEGF165基因有较好的接受性,并获得经G418筛选的成纤维细胞阳性克隆。(2)正义VEGF基因转染可上调细胞内VEGF mRNA和VEGF分泌蛋白的表达,反义VEGF基因转染可减少VEGFrnRNA的表达及蛋白的分泌,但转染前后细胞形态及倍增时间无明显差异性。(3)反义VEGF基因疗法应用于抑制瘢痕增生的研究还需要进一步开展体内实验。