【摘 要】
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目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)模型细胞凋亡及自噬的影响。方法用MPP+诱导SK-N-SH细胞建立PD细胞模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)平行检测PD细胞模型中miR-486-5p、瞬时受体电位M2(TRPM2)的表达;将miR-486-5p mi
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目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的帕金森病(PD)模型细胞凋亡及自噬的影响。方法用MPP+诱导SK-N-SH细胞建立PD细胞模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)平行检测PD细胞模型中miR-486-5p、瞬时受体电位M2(TRPM2)的表达;将miR-486-5p mimics、miR-NC、si-TRPM2、si-NC转染至SK-N-SH细胞,转染后细胞分为Con组、MPP+组、MPP++miR-486-5p组、MPP++miR-NC组、MPP++si-TRPM2组、MPP++si-NC组。流式细胞仪分析PD细胞模型凋亡率;Western blot检测PD细胞模型自噬蛋白标记物微管相关蛋白轻链3II(LC3II)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、线粒体功能相关蛋白线粒体融合蛋白-2(Mfn2)、核呼吸因子1(NRF1)及凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)表达情况;双荧光酶报告基因检测验证miR-486-5p与TRPM2的靶向调控作用。结果MPP~+处理后的SK-N-SH细胞凋亡率明显升高(P<0.05),LC3Ⅱ、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而Mfn2、NRF1、Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);PD细胞模型中miR-486-5p表达水平降低(P<0.05),TRPM2表达水平升高(P<0.05);PD细胞模型中miR-486-5p过表达与干扰TRPM2的表达可明显降低细胞凋亡率与LC3Ⅱ、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达(P<0.05),提高Mfn2、NRF1、Bcl-2蛋白表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明miR-486-5p可靶向调控TRPM2的表达;TRPM2过表达可逆转miR-486-5p过表达对MPP~+诱导的SK-N-SH细胞中线粒体功能相关蛋白、自噬相关蛋白表达及细胞凋亡的作用。结论miR-486-5p过表达可通过下调TRPM2的表达而抑制PD模型细胞凋亡及自噬。
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