论文部分内容阅读
目的：TRPM8是一种属于TRP(transient receptor potential)瞬时受体电位蛋白家族的温度觉非选择性阳离子通道,具有较高的Ca+通透性,薄荷醇、Iclin是其高效激动剂,也可以被冷刺激(8-28℃)、PIP2等激活,研究表明,在CCI神经病理性疼痛动物模型中神经损伤同侧背根神经节(DRG)TRPM8的蛋白表达显著增多,与冷痛觉敏化变化一致,TRPM8参与神经病理性疼痛痛觉敏化的形成与维持。已经证实,降低皮肤温度及外用薄荷醇可以减轻皮肤瘙痒临床症状,同时有学者报道薄荷醇及Iclin可缓解实验性或疾病相关的瘙痒,提示TRPM8可能有中枢性抗瘙痒作用。本研究旨在评估神经病理性疼痛是否抑制瘙痒神经信号传导减少搔抓行发作,并探讨TRPM8在其中的作用。 方法：KM雄性小鼠,20-30g,实验采用坐骨神经分支选择性损伤的方法制备神经病理性痛模型(SNI)和氯喹(CQ)皮下注射诱导瘙痒模型。第一阶段观察SNI病理性疼痛对瘙痒影响及建立疼痛瘙痒共病模型,分为6组:神经病理性疼痛组(SNI)、假手术组(Sham)、瘙痒组(CQ)、瘙痒溶媒组(NS)、疼痛瘙痒共病组(SQ)及空白对照组(CON)。SNI组及SQ组通过暴露分离小鼠左侧坐骨神经和其3个末端分支:腓肠神经、腓总神经和胫神经,结扎并切断腓总神经和胫神经,建立神经病理性疼痛模型,Sham组只暴露分离神经不进行损伤神经操作。CQ予以小鼠颈背部皮下注射200ug/50ul氯喹。SQ组是建立SNI疼痛模型后第五日颈背部注射等剂量容积的氯喹。NS组在小鼠颈背部皮下注射50ul生理盐水对照。CON组是不进行任何操作。第二阶段分为疼痛瘙痒共病模型+AMTB(SQ-A)组和疼痛瘙痒共病模型+AMTB溶媒对照组(SQ-V)。-A组行腰段鞘内注射TRPM8特异性阻断剂AMTB30ug/kg,-V组行腰段鞘内注射TRPM8特异性阻断剂AMTB溶媒(3.2％DMSO+生理盐水)。SNI、Sham、SQ组在术前1天,术后1天、3天及5天观察左后足机械痛缩足反射阈值(MWT)、冷板抬足次数和时间及热板缩足反射潜伏期(PWL)的变化,CON组每间隔一天测定疼痛行为学变化。 CQ、NS、SQ组脱毛后,在分别注射氯喹或生理盐水后观察30分钟内定向注射点搔抓发作潜伏期和搔抓发作次数,CON组观察30分钟内对脱毛处的搔抓次数。第二阶段疼痛模型建立第5天分别鞘注AMTB及溶媒前后测定疼痛行为学,然后注射氯喹和生理盐水,观察搔抓发作潜伏期及30分钟内的搔抓次数。观测动物行为学后,CON组、Sham组、SNI组、SQ组、SQ-A组及SQ-V组每组随机取6只小鼠麻醉后取左侧L4-6背根神经节(DRG),采用Western blotting方法测定TRPM8的蛋白表达水平。CON组、NS组、CQ组、SQ组、SQ-A组及SQ-V组随机取6只小鼠麻醉后快速取颈部脊髓采用Western blotting方法测定GRPR的蛋白表达水平。 结果：疼痛行为学:SNI组及SQ组在术后第1天冷痛抬足次数及时间明显增加,冷痛阈值变化在第三天最显著,MWT也在术后1天降低,并在第5天达较低值,而PWL仅在术后1天下降有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。SNI组及SQ组较Sham组及CON组同一时间点MWT、冷痛阈值明显降低(P<0.001),PWL组间无明显差异(P>0.05)。SQ-A组较SQ-V组鞘注后冷痛阈值显著降低,MWT升高,有统计学差异(P<0.01或P<0.001),两组PWL变化无统计学差异(P>0.05)。瘙痒行为学:与NS组及CON组相比,CQ组定向搔抓次数显著增多,搔抓潜伏期缩短,并有统计学差异(P<0.05),SQ组搔抓次数明显低于CQ组(P<0.05),但搔抓潜伏期无差异(P>0.05)。SQ-A组搔抓次数显著高于SQ-V组(P<0.05),但搔抓潜伏期无统计学意义差异(P>0.05)。蛋白表达:SNI组、SQ组及SQ-V组术侧L4-6背根神经节TRPM8表达水平较CON组、Sham组及SQ-A组增加,而GRPR在CQ组及SQ-A组颈部脊髓的表达增多。 结论：神经病理性疼痛在瘙痒疼痛共病中能够抑制瘙痒神经信号传导,延迟并减少了瘙痒行为学的发作,其机制可能与在SNI神经病理性疼痛模型鼠的背根神经节TRPM8受体表达上调有关,TRPM8受体特异性阻断剂AMTB可减轻痛觉敏化行为及及增加搔抓次数。