NSE基因干扰对黄体细胞增殖及其内分泌标志物表达的影响

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已经证实,神经特异性烯醇化酶(NSE)、突触素(SYP)、五羟色胺(5-HT)和S100B蛋白(S100B)这四种弥散性神经内分泌细胞标志物在山羊黄体细胞中有一定量的表达,然而这四种物质在黄体中挥发的作用,以及它们之间的相互联系尚不清楚,本实验运用细胞培养法、RNA干扰技术、MTT法、免疫细胞化学法、免疫荧光细胞化学法以及实时荧光定量PCR法对干扰前后永生化山羊黄体细胞的增殖情况以及这四种弥散性神经内分泌细胞标志物的表达进行检测。主要结果如下:1. MTT法检测结果显示干扰后的永生化黄体细胞增殖受到抑制。2.免疫细胞化学结果显示,空白组永生化黄体细胞中NSE表达量高于干扰组的表达量,经过RNA干扰过的永生化黄体细胞,部分细胞没有NSE的表达。S100B和SYP在空白组和干扰组中,只有部分细胞微量表达。5-HT在干扰前后没有明显变化。3.免疫荧光细胞化学结果显示,永生化黄体细胞干扰前后,NSE都有表达,在空白组的永生化黄体细胞中,NSE在胞质中大量表达,而在干扰后的永生化黄体细胞,表达量下降,绿色荧光主要分布在核周围的胞质中。5-HT在空白组永生化细胞胞质中有表达,其表达量较NSE要低,而干扰后的永生化黄体细胞,只有个别细胞表达5-HT,并且这些细胞的表达量较高。SYP和S100B在干扰前后都有微量的表达,表达量在干扰前后没有明显差异。4.实时荧光定量PCR结果显示,永生化黄体细胞NSE经过干扰后其mRNA表达量显著低于对照组永生化黄体细胞的mRNA表达量(P<0.05),SYP和S100B的mRNA在干扰前后的永生化黄体细胞中都有微量表达,且表达量没有差异性变化。结果显示干扰永生化山羊黄体细胞NSE基因后,永生化黄体细胞的生长受到抑制,表明NSE在黄体细胞中可能发挥了支持、营养等非糖酵解功能,其表达促进了黄体细胞的增殖。NSE的敲除,导致个别细胞中5-HT的表达异常,而S100B和SYP的表达没有明显变化,表明5-HT的表达与NSE存在着某种联系,S100B和SYP可能在黄体细胞生长中起到了支持作用。
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