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黏虫Mythimns separata(Walker)是一种多食性昆虫,由于其具有远距离的迁飞习性,导致其在我国危害范围广,给我国的农业生产上造成了巨大的经济损失。随着转基因作物在全世界范围大规模的推广种植,在减少化学杀虫剂的使用的同时也高效的控制住了相关害虫的为害。现有的转基因作物绝大部分是转Bt(Bacil us thuringiensis)基因,因为其产生的杀虫晶体蛋白对昆虫有着特异性杀虫作用,但随着其对害虫的选择压力的增加,相关害虫对Bt抗性问题已经日益严峻,本研究则是以黏虫为研究对象,在已经获得黏虫ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白MsABCC2(GenBank登录号为KJ930171.1)和MsABCC3基因cDNA全长的基础上,测定了该基因在幼虫体内不同龄期及不同组织中的相对表达量,同时使用RNAi(RNA interference)技术研究了 ABC转运蛋白的功能。主要结果如下:1.黏虫幼虫MsABCC2和MsABCC3蛋白基因的相对表达量利用实时荧光定量PCR技术,以β-actin为内参基因,结果采用2-△△CT分析方法,得到了幼虫在不同龄期和不同组织中的MsABCC2和MsABCC3的相对表达量。结果显示:在不同龄期幼虫中MsABCC2蛋白基因表达量差异显著(P<0.05)。6龄幼虫体内的基因相对表达量最高,但与4龄、5龄幼虫并没有显著性差异;3龄幼虫体内的基因相对表达量最低,但与2龄幼虫并没有显著差异。对于MsABCC3而言,6龄幼虫体内的基因相对表达量最高,与其他龄期均有显著性差异,5龄幼虫体内的基因相对表达量最低,与4龄幼虫相比差异显著,但与2龄和3龄幼虫并没有显著差异。在检测4～6龄幼虫中肠和除中肠之外的虫体MsABCC2和MsABCC3蛋白基因表达量中,发现4～6龄的幼虫中肠中MsABCC2和MsABCC3蛋白基因的相对表达量均显著的高于除中肠之外的虫体,可以说明MsABCC2和MsABCC3大部分在黏虫幼虫的中肠处表达。2.黏虫ABC蛋白基因的RNAi和沉默后的生物学测定根据MsABCC2和MsABCC3基因序列分别设计了 3个siRNA,分别为si2-1、si2-2、si2-3和si3-1、si3-2、si3-3,通过喂食法进行RNA干扰。利用实时荧光定量PCR检测了喂食了 siRNA 24h、48h和72h后MsABCC2和MsABCC3蛋白基因的相对表达量,结果表明:喂食si2-124h后,幼虫体内MsABCC2蛋白基因的相对表达量相比对照显著地降低了(P<0.05);喂食si3-1和si3-3 72h后,幼虫体内MsABCC3蛋白基因的相对表达量相比对照显著地降低。在得到有效的siRNA的片段后,进一步检测了在沉默MsABCC2和MsABCC3蛋白基因的表达后,其是否会影响黏虫对于Cry1 Ac杀虫蛋白的敏感性。结果表明,黏虫幼虫MsABCC2的表达被抑制后取食含有Cry1Ac毒蛋白的人工饲料,7天后其死亡率显著低于对照组(P<0.05),且未死亡的幼虫其体重也显著高于对照。其结果表明,黏虫对于Cry1Ac毒蛋白的敏感性降低与MsABCC2蛋白基因的表达有关,说明在黏虫体内MsABCC2可能是Cry1Ac毒蛋白的一种受体。