枸杞花药培养体系优化

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枸杞(Lycium Barbarum. L)为茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium)植物,为宁夏“五宝”之首,具有滋肝、补肾、明目、壮阳作用,是著名中药材、高级滋补品和保健品。枸杞是多年生落叶灌木,也是宁夏地区主要经济树种之一。近年来随着枸杞药用保健价值的进一步开发,栽培面积不断扩大,常规育种方法已不能满足现代农业对枸杞品种改良的需求,而培育枸杞新品种的新方法很少。目前,通过单倍体育种方法中的花药培养技术得到的单倍体植株,经加倍后产生的纯合二倍体,在育种上能极早稳定分离后代,缩短育种年限、简化选育程序。在枸杞花药培养上,前人虽有研究,但仅停留在理论探讨上,没有把枸杞花药培养技术真正用于生产实践中。本研究对影响枸杞花药培养的几个因素(基本培养基、激素、活性碳、温度、甘露醇预处理)进行了系统的研究,旨在得到再生植株并移栽,优化枸杞花药培养的条件,建立一套适合枸杞花药培养的技术体系,从而提高枸杞育种效率,加快枸杞育种的选育进程,为枸杞遗传改良和遗传机理研究提供理论依据,从而推动我国枸杞产业的快速发展。试验以宁杞1号、大麻叶、0207、蒙杞1号为材料,采用L32(2×45)正交设计,对影响枸杞花药褐化、愈伤组织诱导率和胚状体发生率的因素进行了研究。试验结果如下:1、不同基因型材料花药培养有显著的差异,在所接种的4个基因型中,褐化程度、愈伤诱导率和胚状体诱导率相差较大,宁杞1号是较易诱导的基因型。2、两种基本培养基的研究中发现:MS比B5更适合宁杞1号和大麻叶花药培养;0207和蒙杞1号在B5上的诱导率更高。3、植物生长调节剂在枸杞花药培养中起着重要的作用,采用不同浓度的2,4-D,KT配比,结果表明,1.0mg/L2,4-D和1.0mg/LKT的配比适合愈伤组织的形成。4、三种温度处理方式中,4℃花蕾低温预处理后经32℃高温培养1天然后转入25℃暗培养最适合宁杞1号的花药培养。5、培养基中加入0.8g/L的活性炭能有效地减轻花药的褐化程度,并能提高胚状体的发生率;但活性炭的加入却降低了愈伤组织的诱导率,而且活性炭浓度越高诱导率越低。6、接种前对花药进行甘露醇预处理能提高愈伤组织的诱导率,甘露醇浓度以0.3mol/L为最佳。7、正交试验结果表明:枸杞花药培养对基因型和植物生长调节剂有很大的依赖性;活性炭对花药褐化率有显著影响,其中影响主次顺序为:活性炭>甘露醇>基本培养基>热激处理>植物生长调节剂;基本培养基和甘露醇对愈伤诱导率的影响都达到了显著水平,主次顺序为:植物生长调节剂>基本培养基>甘露醇>活性炭>热激处理;活性炭对胚状体发生率差异极显著,基本培养基、热激处理,对胚状体发生率的影响都达到了显著水平,影响大小依次为:植物生长调节剂>活性炭>基本培养基>热激处理>甘露醇。
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