论文部分内容阅读
目的：本研究观察经鼻腔连续多次给予大鼠小剂量髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein, MBP）多肽段MBP68-86,对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）发生发展的影响,通过检测脾脏CD4+CD25+调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）在CD4+T细胞中的比例、螺旋转录因子Foxp3mRNA表达水平、细胞因子白介素（IL）-17A、转化生长因子（TGF）-β1含量,探讨Treg在MBP68-86经鼻黏膜诱导的大鼠EAE免疫耐受机制中的作用。为探索多发性硬化（Multiple sclerosis, MS）新的治疗方法提供有意义的基础实验依据。方法：将30只6-8周龄雌性Wistar大鼠随机分为3组,设耐受组、免疫对照组、空白对照组,每组10只。耐受组大鼠经鼻腔给予0.5mg/ml浓度的MBP688660ul,免疫对照组予等量的PBS,每日1次,连续10天,空白对照组未予任何处理,末次给予MBP68-86后第2天,两组大鼠均足垫注射200μgMPB68-86与完全弗氏佐剂（Complete Freund’s adjuvant, CFA）,并分别在免疫当天与免疫48小时后腹腔注射百日咳毒素（pertussis toxin, PTX）免疫建立EAE模型,空白对照组注射等量PBS+CFA。每日予神经功能评分并记录发病情况,在发病高峰期免疫第16天时断头处死大鼠迅速取出脾脏。取脑组织行HE染色观察中枢神经系统（CNS）炎症情况,分离脾脏制得脾淋巴细胞悬液,流式细胞术（FCM）检测各组大鼠脾细胞中CD4+CD25+Treg/CD4+T比例,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠脾细胞Foxp3mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠脾细胞上清IL-17A、TGF-β1的水平。结果：（1）各组大鼠神经功能变化病程中空白对照组大鼠均未发病,耐受组与免疫对照组大鼠在免疫后7-11天相继发病,但与免疫对照组相比,耐受组大鼠平均发病日期延长（P<0.05）,发病率降低、临床症状减轻、神经功能评分降低（P<0.05）；（2）各组大鼠脑组织病理堂变化免疫对照组在发病高峰期HE染色可见脑组织多部位、血管周围大量炎性细胞浸润,小血管明显扩张,成“袖套样”改变,而耐受组大鼠上述病变明显减轻,空白对照组鼠脑组织HE染色几乎未见炎性浸润灶；（3）大鼠脾细胞CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞耐受组大鼠脾CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞比值高于免疫对照组（P<0.05）与空白对照组（P<0.05）,免疫对照组较空白对照组低,但差异无显著性（P>0.05）；（4）大鼠脾细胞Foxp3mRNA表达耐受组大鼠脾细胞Foxp3mRNA表达量高于免疫对照组（P<0.05）与空白对照组（P<0.05）,耐受组与空白对照组差异无显著性（P>0.05）；（5）大鼠脾细胞上清液白介素IL-17A、转化生长因子（TGF）-β1浓度耐受组大鼠脾细胞上清液IL-17A浓度低于免疫对照组（P<0.05）和空白对照组（P<0.05）。耐受组大鼠脾细胞上清液TGF-β1浓度高于免疫对照组（P<0.05）和空白对照组（P<0.05）。结论：预先经鼻腔连续多次给予小剂量MBP68-86可有效减轻MBP68-86诱导的EAE病情严重程度。其耐受机制可能与耐受组大鼠体内CD4+CD25+Treg含量升高及分泌抗炎因子TGF-β1增多,炎症因子IL-17A减少有关。