【摘 要】
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细胞死亡是维持生命体正常形态功能与生长发育的所必须的生命过程。细胞坏死是细胞死亡的一种重要途径,区别于细胞凋亡,它能引起细胞损伤。现已证实这种细胞死亡方式在机体内受到严格的分子调控,因而又被称作细胞程序性坏死。本文选择TNFR1(肿瘤坏死因子受体1)所介导的细胞的程序性死亡信号通路为研究方向,对该通路中重要信号分子RIPK1以及FADD的死亡结构域复合体的结构以及相互作用模式进行研究,以期望从分子
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细胞死亡是维持生命体正常形态功能与生长发育的所必须的生命过程。细胞坏死是细胞死亡的一种重要途径,区别于细胞凋亡,它能引起细胞损伤。现已证实这种细胞死亡方式在机体内受到严格的分子调控,因而又被称作细胞程序性坏死。本文选择TNFR1(肿瘤坏死因子受体1)所介导的细胞的程序性死亡信号通路为研究方向,对该通路中重要信号分子RIPK1以及FADD的死亡结构域复合体的结构以及相互作用模式进行研究,以期望从分子层面解释二者协同调控细胞死亡的具体机制。前期研究中,已证实人源RIP1死亡结构域与FADD死亡结构域体外表达蛋白具有相互作用。本论文构建了一系列人源RIP1和FADD死亡结构域的原核重组质粒。采用基因共表达和菌株共破碎等方法构建复合体蛋白原核表达体系,经镍柱亲和层析、凝胶过滤层析以及阴离子交换层析等方法纯化蛋白质。多角度光散射实验测量复合体蛋白绝对分子量为276.9kDa;动态光散射实验证明蛋白溶液为适中分散体系,均一性良好。利用负染电镜技术观察结晶蛋白质颗粒规则分布。经过晶体初筛与优化实验,获得棒状与菱形多面体两种形态晶体,可用于X-ray射线衍射,数据收集。结合分子置换法(MR)与单波长反常散射(SAD),解析出2.6A分辨率结构,只包含RIP1死亡结构域的晶体结构。基于这个RIP1死亡结构域结构,我们搭建了 RIP1与FADD死亡结构域的相互作用的初始模型,通过突变已解析RIP1死亡结构域不同作用面上的基团,进行GST pull-down实验验证找到影响二者体外结合的位点。本课题为RIP1与FADD死亡结构域的复合物的结构研究奠定了重要基础。
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雄激素受体(AR,NR3C4)是核受体(NRs)中的类固醇受体亚家族成员之一,也是经典的配体依赖性转录因子。AR在人体的发育、代谢和生殖中发挥重要作用,尤其与前列腺的发育密切相关。AR失调会导致包括前列腺癌(PCa)在内的多种疾病。PCa为全世界男性中第二大最常见癌症。作为AR内源性配体的雄激素曾被归咎于过度激活了细胞内的AR活性并直接促进了 PCa的发生和恶化。通过药物或手术阻断雄激素激活AR,
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