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本实验主要观察神经活性肽Urocortin-2(UCN-2)对吗啡成瘾大鼠纹状体(Striatum,STR)神经元放电的影响,以及观察了UCN-2对吗啡成瘾大鼠行为学和学习记忆功能影响,并对相关机制进行初步探讨,为临床阿片类药物成瘾的脱毒治疗提供理论支持及药物作用靶点。方法本研究选择了Sprague-Dawley(SD)大鼠作为实验对象,各部分实验均分成三组,包括空白对照组(Normal group,NG),吗啡成瘾模型组(Morphine Addiction Model Group,MAG组),以及MAG+UCN-2组(吗啡成瘾模型+给予UCN-2),各组实验动物给药或造模后12天,测定实验结果。采用12d序贯法给予吗啡制备成瘾模型后,应用纳洛酮诱导戒断症状的产生,进行Koobs症状评分;行为学实验包括:应用转棒仪器进行疲劳转棒实验;力竭游泳实验测定游泳时间等。采用Morris水迷宫行为学实验,测定UCN-2对吗啡成瘾大鼠学习、记忆能力的改善作用。另外,采用微电泳的电生理学方法,观察UCN-2对吗啡成瘾大鼠STR神经元自发放电的影响。给予促皮质激素释放因子受体阻断剂——AST-2B及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)抑制剂,明确UCN-2抑制吗啡成瘾中发挥作用的可能机制。上述实验结束后,取各组实验动物的脑组织进行病理学检测,另取脑组织匀浆,采用蛋白质印迹法检测AKT及p-AKT的表达情况,对UCN-2影响吗啡成瘾大鼠行为学作用的相关机制进行初步探讨。结果1.UCN-2能明显降低成瘾大鼠的Koobs症状评分,对戒断综合征有改善作用,与MAG模型组相比,具有显著性差异(P<0.05)。2.UCN-2对吗啡成瘾大鼠分抗疲劳的作用:(1)UCN-2能延长吗啡成瘾大鼠的顺时针模式、逆时针模式转棒时间,与MAG组相比,具有显著性差异(P<0.05)。(2)在游泳力竭实验中,与MAG组相比,给予UCN-2后,游泳时间延长,挣扎时间、学会游泳时间明显缩短,具有显著性差异(P<0.05),提示UCN-2能明显提高改善吗啡成瘾大鼠的行为学指标,且提高学习能力。3.UCN-2对吗啡成瘾大鼠学习记忆能力的改善作用:在Morris水迷宫行为学实验中,UCN-2能延长吗啡成瘾大鼠在原平台象限的游泳时间,能缩短逃避潜伏期和总的游泳路程,与MAG组相比,具有显著性差异(P<0.05)。4.UCN-2对吗啡成瘾大鼠STR神经元放电情况的影响:UCN-2能使吗啡成瘾大鼠STR神经元放电频率减慢,减少神经元的爆发放电,与MAG组相比,具有显著性差异(P<0.05)。UCN-2对吗啡成瘾大鼠STR神经元放电的抑制作用,可被PKB抑制剂及CRF-2R阻断剂AST-2B取消。5.UCN-2对吗啡成瘾大鼠脑组织病理改变的影响:记录部位的神经元蓝染,证明STR定位准确。与MAG相比,UCN-2组神经元排列较规则,神经元胞体大小较正常,神经细胞的变性坏死和空泡样改变等减少。6.UCN-2对吗啡成瘾大鼠AKT表达的影响:UCN-2给药组中AKT蛋白表达量降低,然而p-AKT的表达量升高,该实验结果与MAG组相比,具有统计学意义(P<0.05)。结论1.UCN-2能改善吗啡成瘾大鼠的戒断综合征,提高大鼠的抗疲劳能力,改善吗啡成瘾大鼠的学习记忆能力,证明其对吗啡成瘾有治疗作用。2.UCN-2能抑制吗啡成瘾大鼠的STR神经元的异常高频放电,并能改善脑组织的病理结构。3.UCN-2对吗啡成瘾大鼠行为学的改善和学习记忆能力的提高,其可能机制是通过与CRF-2受体结合以后,进而影响了p-AKT—AKT信号通路实现。