【摘 要】
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本课题组从舟山海域石油污泥中筛选出一株可利用橄榄油生产生物表面活性剂的ZS6菌株,测定其16s r DNA后确定为液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）。沙雷氏菌产生表面活性剂的类型主要为沙雷湿剂Serrawettin,我们对ZS6基因组进行测序后发现,不同于其它产表面活性剂的沙雷氏菌如Serratia sp.WW4,ZS6基因组中不含有完整的沙雷湿剂合成酶。经实验证实,ZS6
【基金项目】
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横向项目:遗传修饰假单胞菌ZS1生产不同鼠李糖脂类型与提高产量；
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本课题组从舟山海域石油污泥中筛选出一株可利用橄榄油生产生物表面活性剂的ZS6菌株,测定其16s r DNA后确定为液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）。沙雷氏菌产生表面活性剂的类型主要为沙雷湿剂Serrawettin,我们对ZS6基因组进行测序后发现,不同于其它产表面活性剂的沙雷氏菌如Serratia sp.WW4,ZS6基因组中不含有完整的沙雷湿剂合成酶。经实验证实,ZS6产生乳化活性是由于脂肪酶LipA在培养过程中释放到细胞外,作用于油脂使其分解产生具有乳化活性的甘油二酯和甘单酯,进而体现出乳化活性。因此我们设计实验对ZS6脂肪酶基因lip A进行敲除,构建lip A缺失型的ZS6突变株。在油脂做唯一碳源的条件下培养,观察到lip A缺失型的突变株乳化活性和脂肪酶释放的量较野生型均大幅度减少,证明脂肪酶LipA对ZS6表面活性剂产量具有重要作用。通过将脂肪酶克隆至p ET28a质粒上,对脂肪酶LipA进行异源（大肠杆菌BL21）和同源（ZS6野生型细胞）诱导表达,获得了脂肪酶LipA的纯化蛋白。纯化后的脂肪酶LipA在体外试验中酶活性达到约1400 U/mg。综上所述,本文证明Serratia sp.ZS6菌株在培养过程中会向细胞外释放活性较高的脂肪酶LipA。经过将脂肪酶诱导表达和纯化后可以获得纯度较高的脂肪酶LipA单体。本研究中关于脂肪酶的实验,可以推广到废弃油脂处理,大规模生产甘油二酯和甘单酯等方面,具有一定实用价值。
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