目的:1.参照Ozdemir[1]所建立的大鼠高氧肺损伤模型,观察高氧暴露后新生大鼠的肺组织病理变化情况。2.研究高氧致新生大鼠肺损伤肺组织中ROS、p-JNK蛋白的表达、细胞凋亡的情况及相互关系,探讨三者在高氧致新生大鼠肺损伤中的作用3.研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对高氧致新生大鼠肺损伤肺组织中ROS、p-JNK及细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制,为NAC成为早期防治新生儿高氧肺损伤的药物提供实验依据。方法:1.实验分组:将72只生后第3d的SD大鼠随机分为以下3组(每组n=24):空气+生理盐水组(空气组对照组)、高氧+生理盐水组(高氧暴露组)和高氧+N-乙酰半胱氨酸组(NAC干预组)。2.模型制作及药物干预:自制高氧氧箱,氧箱内持续通入100%氧气,将高氧暴露组和NAC干预组的新生大鼠置于高氧氧箱中,空气对照组置于同一室内的常压空气中。NAC组于实验第1d开始腹腔注射NAC 150mg/kg,连续14d,空气对照组和高氧暴露组于相同时间点腹腔注射等容积的生理盐水。3.标本的采集与检测指标:分别在实验第3d,7d,14d从各组中取8只新生鼠断头处死,开胸取肺组织。将右侧肺组织置于少量的PBS中,然后置于液氮中速冻,用Elisa法检测肺组织中ROS浓度;将左侧肺组织置于中性甲醛溶液中固定后石蜡包埋,用HE染色观察肺组织病理学变化,用免疫组化法检测p-JNK蛋白表达并计算累积光密度值(IOD),用TUNEL法检测肺组织细胞凋亡并计算凋亡指数(AI)。结果:1.肺组织病理学改变:在光镜下观察,空气对照组肺组织结构正常。高氧暴露组3d可见肺泡间隔充血水肿,少量炎症细胞渗出。高氧暴露组7d可见肺泡间隔增宽,充血水肿加重,大量炎症细胞浸润,部分肺泡腔内可见渗出液,肺组织结构紊乱。高氧暴露组14d可见肺泡间隔充血水肿减轻,炎症细胞减少,肺组织结构紊乱。NAC干预组各时间点较高氧暴露组肺泡间隔充血水肿减轻,炎症细胞减少,肺泡间隔厚度变薄,肺组织结构未见明显紊乱。2.肺组织中ROS浓度变化:高氧暴露组、NAC干预组各时间点的ROS浓度均高于空气对照组(P<0.01);NAC干预组各时间点ROS浓度均低于高氧暴露组(P<0.01)。空气对照组中各时间点之间的ROS浓度比较无统计学意义(P>0.05);高氧暴露组中3d的ROS浓度开始升高,7d达到高峰,14d ROS浓度下降,各时间点两两比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);NAC干预组中3d ROS浓度开始升高,7d达到高峰,14d ROS浓度下降,各时间点两两比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。3.肺组织中p-JNK蛋白变化及分布:高氧暴露组、NAC干预组各时间点的p-JNK蛋白表达均高于空气对照组(P<0.01),肺泡上皮细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞及炎症细胞中均可见大量阳性细胞的表达;NAC干预组各时间点的p-JNK蛋白表达低于高氧暴露组(P<0.01)。空气对照组中各时间点之间的p-JNK蛋白表达比较无统计学意义(P>0.05);高氧暴露组中3d的p-JNK蛋白表达开始升高,7d达到高峰,14d p-JNK蛋白表达下降,各时间点两两比较差异有显著统计学意义(P<0.01);NAC干预组中3d的p-JNK蛋白表达开始升高,7d达到高峰,14d p-JNK蛋白表达下降,各时间点两两比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。4.肺组织细胞凋亡的变化及分布:高氧暴露组、NAC干预组的凋亡细胞明显增加,肺泡上皮细胞、血管内皮细胞,巨噬细胞、炎症细胞中均可见大量凋亡细胞,各时间点凋亡指数与空气对照组相比显著升高(P<0.01);NAC干预组各时间点凋亡指数均低于高氧暴露组(P<0.01)。空气对照组中各时间点之间的凋亡指数比较无统计学意义(P>0.05);高氧暴露组中3d的凋亡指数开始升高,7d达到高峰,14d凋亡指数下降,各时间点两两比较差异有显著统计学意义(P<0.01);NAC干预组中3d的凋亡指数开始升高,7d达到高峰,14d凋亡指数下降,各时间点两两比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。5.ROS、p-JNK蛋白、AI的之间相关分析:高氧暴露组新生大鼠肺组织中ROS、p-JNK、AI两两均呈正相关(P<0.01)。结论:1.我们已成功建立新生大鼠高氧肺损伤模型,高氧暴露后新生大鼠肺组织病理可见肺泡间膈增宽,充血水肿,炎症反应,肺组织结构紊乱等。2.高氧暴露后新生大鼠肺组织中ROS、p-JNK蛋白表达及细胞凋亡增加,提示ROS-JNK-细胞凋亡通路可能是高氧致新生大鼠肺损伤原因之一。3.高氧暴露组新生大鼠肺组织中ROS、p-JNK及凋亡指数两两相关性分析均成正相关,提示ROS、p-JNK和细胞凋亡可能在高氧致新生大鼠肺损伤中起协同作用。4.NAC可能通过抑制ROS的产生,减少p-JNK蛋白的表达,最终减轻细胞凋亡,从而发挥对高氧致新生大鼠肺损伤的保护作用。