研究目的:养血清脑颗粒是天士力集团根据中医药传统理论,采用最新的工艺独家研制生产的现代中药,具有良好的临床效果,现已成为天士力集团的重点产品之一。本论文以养血清脑颗粒为研究对象,结合其相关药理作用的文献报道,通过研究其入血成分及体内药代动力学过程,进一步提升养血清脑颗粒的质控标准。为保证临床安全、有效用药提供有力支持,为产品的深入研究及二次开发奠定基础。研究方法:(1)应用HPLC、LC/MS-IT-TOF等分析技术,结合体外肠外翻实验和健康大鼠体内血浆样品分析实验,对养血清脑颗粒的入血成分进行了研究。(2)针对上述入血成分建立了 LC-MS/MS测定方法,并对该方法的线性、精密度、准确度、回收率、稳定性等方面进行了考察,最终应用于养血清脑颗粒大鼠体内药动学研究。取灌胃给药后24h内大鼠血样,经预处理后进行LC-MS/MS分析,将血药浓度-时间数据采用Topfit 2.0药代动力学软件按非房室模型处理,计算大鼠体内不同入血成分的主要药代动力学参数,并进行统计分析。(3)建立多波长HPLC-DAD方法,并对该方法的线性、精密度、准确度、回收率、稳定性、重复性等方面进行了考察。并将该方法应用于养血清脑颗粒制剂不同批次间主要入血成分含量的差异性考察,最终实现养血清脑颗粒质量的全面、准确控制和评价。研究结果:(1)结合体内、外实验,通过样品和对照品的对比,最终确定了原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、芍药苷、阿魏酸、迷迭香酸、延胡索乙素七种入血成分。(2)该实验建立的LC-MS/MS法,其专属性、精密度、准确度、提取回收率和稳定性等均达到体内药物分析的要求,并成功应用于养血清脑颗粒的药代动力学研究。结果表明养血清脑颗粒中有机酸等化合物在大鼠体内吸收迅速,如芍药苷、阿魏酸的Tmax(h)分别为0.37±0.13h,0.19±0.04h,很快在血液中达到最大血药浓度,但半衰期比较短。芍药苷和阿魏酸在大鼠体内的血药浓度比较大,在大鼠体内的暴露量也是最高的两个化合物,其 AUC0-24(ng.h/mL)分别为 11391.69±3441.01,5138.08±1510.48;AUC0-oo(ng-h/mL)分别为 11667.20±3429.30,5258.01±1535.31。(3)本实验中建立的HPLC-DAD方法专属性、精密度、准确度、提取回收率、重复性和稳定性等均达到方法学要求。并应用于不同批次间养血清脑颗粒中七种主要入血成分原儿茶酸、绿原酸、阿魏酸、迷迭香酸、芍药苷、咖啡酸、延胡索乙素含量测定。结果稳定、可靠。研究结论:(1)本课题首先通过肠外翻实验来考查养血清脑颗粒中能够通过肠吸收进入到血液中的物质,再进行血浆样品的质谱分析,根据准分子离子和子离子数据,经过与对照品比对,最终确定了七种主要入血成分:原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、芍药苷、迷迭香酸和延胡索乙素。(2)以确定的七种主要入血成分为指标成分进行了养血清脑颗粒在大鼠体内药动学实验,通过血药浓度的测定计算出各成分药动学参数。由实验数据可知在已确定的入血成分中芍药苷所占的权重系数最大,阿魏酸次之,目前养血清脑颗粒的质控指标也仅为芍药苷,这充分说明了体内和体外的一致性,将芍药苷作为养血清脑颗粒的质控指标是科学合理的。以上所监测的七种化合物均具有药效学作用,其药效学作用也与养血清脑颗粒的临床主治功能相吻合,如果这些成分也作为质控指标进行测定,这将大大提升养血清脑颗粒的质控标准。(3)整合后养血清脑颗粒T1/2为5.08h,属于中速消除类(T1/2=4-8h)药物,此类药物主张3-4次/d的给药方案,以使血药峰谷浓度在最小的范围内波动。目前养血清脑颗粒也是3次/d服药,以上实验也充分证明了养血清脑颗粒临床给服药次数的合理性。