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丙型肝炎病毒(Hepatitis c virus,HCV)感染可导致肝纤维化,肝硬化,肝癌甚至死亡,严重危害了人类健康。NS3/4A蛋白酶是研发抗HCV药物的重要靶点,本研究利用实验室已构建好的NS3/4A蛋白酶抑制剂筛选模型从真菌SIPIFW-F4581和云南美登木中筛选活性化合物,并进行结构鉴定和定量的NS3/4A蛋白酶抑制活性评价。首先对真菌SIPIFW-F4581的发酵培养基进行了筛选,考察了Y-1培养基、Y-2培养基、Y-3培养基、Y-4培养基、Y-5培养基和Y-6培养基,结果显示Y-1培养基和Y-6培养基发酵真菌SIPIFW-F4581时,其代谢产物具有较高NS3/4A蛋白酶抑制活性。接着,本研究利用Y-1培养和Y-6培养基进行SIPIFW-F4581的大规模发酵,并对其产生的代谢产物进行以活性为导向的分离纯化。最终获得两个活性化合物:J-1和J-2,其中J-1为新化合物,命名为(E)-2,4-二羟基-6-丙烯基苯甲醛,IC50是17.9 m M;J-2结构鉴定为(2S,3R)-2,3,4-三甲基-5,7-二羟基-2,3-苯并二氢呋喃,IC50是312.0μM,本研究为首次发现其NS3/4A蛋白酶抑制活性。利用NS3/4A蛋白酶抑制剂筛选模型追踪美登木中活性成分,经分离纯化获得四个活性化合物:化合物Z-1,结构鉴定为(-)-4’-O-甲基表被儿茶素,IC50是440.0μM;化合物Z-2,结构鉴定为山奈苷,IC50为135.8μM;化合物Z-3,结构鉴定为山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷,IC50为49.2μM;化合物Z-4,结构解析属于黄酮醇苷类化合物,IC50为110.3μM。从美登木中获得的四个活性化合物均为首次发现其有NS3/4A蛋白酶抑制活性,其中化合物Z-1,Z-3为首次从美登木属中分离得到。综上所述,本研究从真菌SIPIFW-F4581和美登木中获得了6个具有一定NS3/4A蛋白酶抑制活性的化合物,其中J-1为新化合物。这些活性化合物可作为先导化合物,进行进一步的结构修饰和临床前研究,有助于新的抗HCV药物的开发。