1.他克莫司对嘌呤霉素损伤的肾小球足细胞Park7表达的影响 2.以激素耐药型肾病综合征起病Alport综合征15例临床分析

来源 :广州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lzc5812286
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目的体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC-5),构建嘌呤霉素(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤肾小球足细胞模型,探讨研究嘌呤霉素对肾小球足细胞凋亡及Park7 m RNA和蛋白表达的影响,以及他克莫司(Tacrolimus,FK506)对足细胞损伤的保护机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,设置三组:(1)对照组(空白对照组);(2)PAN组[PAN(浓度50mg/L)];(3)FK506组[PAN(浓度50mg/L)和FK506(浓度5mg/L)]。分别于三个时间段(12h、24h和48h)在倒置显微镜(×200)观察小鼠肾小球足细胞的形态结构,拍照并记录;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞技术检测各组足细胞(12h、24h和48h)的凋亡率;实时荧光定量PCR检测各组足细胞(12h、24h和48h)的Park7 m RNA表达情况;Western Blot检测各组足细胞(12h、24h和48h)的Park7蛋白表达情况;免疫荧光染色法检测各组足细胞(12h、24h和48h)Park7蛋白的分布情况。结果(1)足细胞形态:对照组中各时间点足细胞胞体足突数量多,细胞之间连接紧密,呈正常形态;PAN组中各时间点胞体面积较对照组明显缩小,细胞间连接松散,可见足细胞破碎。FK506组中各时间点体面积较PAN组增大,细胞之间的连接较紧密,形态好转。(2)足细胞凋亡率:对照组中足细胞凋亡率各时间点均处于较低值水平。PAN组中12h、24h足细胞的凋亡率较对照组明显升高,且48h足细胞凋亡率升高更为显著,组间差异具有统计学意义(P<0.01)。FK506组中,足细胞凋亡率高于对照组,在各时间点凋亡率较PAN组均有所下降,组间差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)荧光定量PCR显示对照组中各时间点Park7 m RNA的表达量相对较低。PAN组中各时间点的Park7 m RNA表达量均较对照组显著增高,组间差异具有统计学意义(P<0.01)。FK506组与PAN组相比,Park7 m RNA的表达量在各时间点较PAN组下降,组间差异具有统计学意义(P<0.01)。(4)Western blot显示对照组中各时间点Park7蛋白表达量相对较低。PAN组中各时间点Park7蛋白表达量均较对照组显著增高,组间差异具有统计学意义(P<0.01)。FK506组与PAN组比较,Park7蛋白的表达量在各时间点较PAN组下降,组间差异具有统计学意义(P<0.01)。(5)免疫荧光染色显示对照组中各时间点Park7均匀分布在细胞膜表面和细胞质中,在细胞核周围也看到颗粒状分布。PAN组与对照组相比,Park7蛋白分布在细胞膜和细胞质中明显增加,呈密集簇状分布,荧光强度增加。FK506组与PAN组比较,在细胞膜上各时间点分布更均匀,细胞核周围呈粗颗粒状分布,在整个细胞中的分布较PAN刺激组有明显改善。结论(1)嘌呤霉素(PAN)作用于肾小球足细胞可引起Park7表达上调,导致足细胞形态结构的损伤及凋亡,Park7 m RNA及蛋白的表达上调,Park7蛋白分布免疫荧光强度增强。(2)他克莫司(FK506)可有效抑制PAN对足细胞的损伤作用,稳定Park7的表达,使Park7 m RNA和蛋白表达下调,维持细胞功能稳态,减轻蛋白尿,延缓肾小球硬化。目的对以儿童激素耐药型肾病综合征(steroid-resistant nephrotic syndrome,SRNS)起病的Alport综合征(Alport syndrome,AS)的临床资料、病理和基因检测情况进行临床分析,以提高对AS的认识。方法选取2015年1月至2019年12月广州医科大学附属广州市第一人民医院儿科初治均诊断为原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS),经过治疗效果不佳,从最初的激素依赖型肾病综合征(steroid-dependent nephrotic syndrome,SDNS)到SRNS,最后经过基因检测确诊为AS的15例患儿,综合分析其临床特点、病理、肾外表现及基因检测等情况。结果(1)15例AS患儿中,均有镜下血尿,均有不同程度的水肿、大量蛋白尿、低蛋白血症和高脂血症,其中蛋白尿伴肉眼血尿的3例,出现尿素氮/血肌酐明显升高2例。(2)13例患儿行肾穿刺活检病理检测,AS患儿肾脏病理检查结果呈多样性,中度系膜增生性肾小球肾炎3例,局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)3例,Ig A肾病3例,薄基底膜肾病2例,肾小球轻微病变1例,轻度系膜增生性肾小球肾炎1例。(3)15例PNS患儿均进行基因检测,发现COL4A5基因突变13例,COL4A4和COL4A3基因突变各1例。结论临床对于SRNS治疗效果不佳,应积极询问家族史,尽早行AS基因检测,早期诊断有助于判断患儿的预后,避免不必要的药物治疗,达到精准治疗。
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