研究背景及目的重症肌无力（Myasthenia gravis,MG）是一种依附于T细胞,补体参与,和抗烟碱型乙酰胆碱受体抗体传送的,针对神经肌肉接头处突触后膜上乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor,AChR）持续性伤害破坏的一种自身免疫性疾病^[1,2]。该病的发生已8-20/10万为高,并有逐年增加的趋势。临床主要特征是局部或全身横纹肌于活动时易于疲劳无力。主要累及眼外肌、四肢、延髓诸肌肉,严重时出现呼吸肌无力（重症肌无力危象）,常危及生命。EAMG（Experimental autoimmune myasthenia gravis）与人类MG有不少近似之处,尤其是在临床特征、电生理变化、机体调节机制及病理病生方面有不少近似之处,近期国内外研究均证实Lewis重症肌无力大鼠模型可用以研究MG的信号传导通路及新型免疫抑制剂的开发。目前MG的临床治疗方法主要包括:抗胆碱脂酶类药物、糖皮质激素、静脉用免疫球蛋白、胸腺切除术和血浆替换疗法等。这些方法虽然对疾病有效,但常不能完全控制疾病,且花费巨大,副作用较大。所以,若能研发出获取方便、价格低廉、毒副作用小的免疫抑制剂治疗MG,将会造福广大患者,带来巨大的社会效益和产业前景。白芍是芍药（paeonialactif lora）的干燥根,芍药是毛科植物中较典型的一种。其在类风湿关节炎、滑膜行关节炎、SLE等自身免疫性疾病中发挥的作用日益加重,已成功吸引国内外临床医学及制药业的高度重视。其作用物质已被成功获得,关键是一组糖苷类物质,统称为白芍总苷（total glucosidesof peony,TGP）,它被称为总glucosidesof（TGP）,牡丹和芍药苷的含量,这是牡丹的一个重要组成部分,超过对白芍总苷的总甙90%^[4]。近期来自于国内外研究进一步证实,TGP同其它免疫抑制剂一样,存在较有效的对抗炎症、免疫调节及较好的抵制氧化功能^[5-7],Jing Li等利用实验性动脉硬化动物模型研究发现TGP及TNFα、IL-6等炎性分子水平^[8],Ming Zhao等发现TGP通过增加狼疮患者CD4+细胞中的FOXP3去甲基化,进而上调CD4+CD25+T细胞数量^[9]。TGP可有效治疗SLE（systemic lupus erythematosus）的相关报道已经发布,持续服用TGP 5年以上者,明显减少糖皮质激素及甲氨蝶呤等的应用水平^[10]。目前国内外尚没有TGP治疗MG及EAMG的报道,综上所述,TGP抗炎作用确切,而且TGP胶囊1998年被中国国家食品药品监督管理局批准为治疗类风湿关节炎（rheumat-oid arthritis,RA）的抗炎及免疫调节类药物（批号:x-456）,其在RA治疗的临床应用已较成熟,安全性高,若能应用于MG治疗,将比其他免疫抑制剂更胜一筹。1材料1.1试验:是6-8周龄雌性Lewis大鼠选用体重约140-160g。1.2主要抗原:乙酰胆碱受体α亚基97-116。2实验方法2.1 EAMG模型的诱导和临床评分第一次免疫:给予大鼠相应抗原进行第一次免疫。各组大鼠200ul抗原乳剂（含50克r97-116肽、2毫克结核分枝杆菌,不完全弗式佐剂）自尾根慢慢注入到皮下组织,形成皮丘,无抗原乳液外溢。该过程应在大鼠饲养第7天进行（普通条件下）,可有效减少大鼠死亡率。记第一次免疫当天为第0天。免疫后第30 d继续上述免疫一次,也称加强免疫,注意仔细操作,避免大鼠尾根部溃烂。采用双盲法每天记录大鼠的体重和准确评分。用Lennon标准评价各组大鼠肌肉强度的变化。2.2白芍总苷治疗EAMG将18只Lewis大鼠随机分成白芍总苷大剂量组（150mg/Kg.d）、白芍总苷小剂量组治疗组（50mg/Kg.d）和对照组（等体积的溶剂CMC-Na）。于EAMG大鼠发病初期开始每日给予白芍总苷灌胃治疗,直至大鼠发病高峰期第54 d。2.3流式细胞仪检测大鼠淋巴结中Foxp3、IFN-γ、IL-4的表达在实验室超洁净工作台迅速分离腹股沟淋巴结,并立即选择相应的细胞滤器和培养皿,充分切除淋巴结,尽可能多地准备淋巴结单核细胞悬液。经离心、洗涤、破膜、染色、再洗涤、再离心等处理后,使用流失细胞仪检测淋巴细胞中膈细胞因子的含量。2.4 CCK-8细胞增殖实验分为R97-116刺激组和对照组。细胞培养64 h后,吸取每孔细胞培养上清液,-20℃保存,择日检测细胞因子,继而每孔加入10 L CCK-8,4 h后酶标仪测定其光密度值（OD值）。2.5 ELISA检测大鼠血清抗R97-116抗体大鼠饲养第54天,即大鼠重症肌无力发病高峰期,麻醉后解剖大鼠,注射器抽取心脏血2-3ml,ELISA法测血清中抗R97-116抗体的含量。3数据处理与统计学分析采用spass 20.0统计软件分析,对两组标本进行独立样本t检验,p<0.05具有统计学意义。结果表达为均值±标准差。结果:1)TGP干预后,观察EAMG发病情况,看有无缓解。2)TGP干预后,检测Th1/Th2/Th17型等成分在EAMG治疗组及对照组中的变化情况。3)TGP干预后,检测EAMG淋巴结FOXP3的表达情况。4)TGP干预后,检测EAMG的淋巴细胞增生活性。5)TGP干预后,检测EAMG的淋巴细胞的凋亡。6)TGP干预后,检测EAMG淋巴细胞各亚群的比例,尤其是调节性T细胞（Treg）,看对EAMG有无免疫调节作用。7)TGP干预后,检测体外EAMG淋巴细胞培养液上清中Th1/Th2/Th17细胞因子。8)TGP干预后,检测EAMG淋巴结单个核细胞IL-4、IFN-γ型细胞因子表达情况。结论:1白芍总苷能改善EAMG大鼠临床症状,延缓病情进展。2白芍总苷下调EAMG大鼠淋巴结IFN-γ的表达。3白芍总苷对细胞增殖实验的影响。4白芍总苷可有效上调细胞因子IL-4的表达。5白芍总苷降低EAMG大鼠血清抗R97-116抗体水平。6白芍总苷可提高Treg的比例,对免疫调节有重要作用。7白芍总苷使EAMG机体产生Th1/Th2/Th17细胞因子,介入机体免疫调节。白芍总苷通过上调调节性T细胞（Treg）和Th2型细胞因子IL-4,及下调其他相关炎症因子如IFN-γ等,降低血清中抗R97-116抗体水平,使EAMG临床症状得到改善,延缓病情进展。