杜仲叶提取物及其单体槲皮素、(+)-丁香脂素抑制BMSCs成脂分化研究

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目的研究杜仲叶提取物抑制BMSCs成脂分化作用及其有效物质的筛选。方法取SD大鼠(一个月龄左右)1只,通过全骨髓贴壁法分离SD大鼠BMSCs;用流式细胞学方法进行BMSCs鉴定;分别用苔盼蓝计数法及MTT法对细胞生长曲线进行测定;配制脂肪细胞分化诱导液,初步对杜仲叶提取物及其单体化合物进行研究,实验分4组:药物(1μg/ml)+阳性组、药物(0.01μg/ml)+阳性组、阳性组、阴性组;对有效物质进行下一步实验,实验分5组:药物(1μg/ml)+阳性组、药物(0.1μg/ml)+阳性组、药物(0.01μg/ml)+阳性组、阳性组、阴性组;干预14天后终止培养,观察各组细胞形态学改变,并用油红O染色法进行细胞染色、并计数;用荧光定量PCR法分别检测脂肪细胞分化关键基因PPARγ2及C/EBPα表达水平。结果流式细胞仪检测结果显示CD29、CD90阳性率分别为93.86%、92.16%,CD34、CD45阳性率分别为6.99%、5.31%;苔盼蓝法对第3、4、5代BMSCs进行计数,发现不同代数细胞生长趋势相仿,继续用MTT法检验第3代细胞生长情况,结果与苔盼蓝计数一致;油红O染色及计数成脂率结果示,与阳性组比较,杜仲叶提取物、槲皮素、(+)-丁香脂素各干预组脂肪细胞分化率均减少(p<0.05),且具有药物浓度依赖性;荧光定量PCR法检测基因结果显示:与阳性组相比,杜仲叶提取物、槲皮素、(+)-丁香脂素各药物干预组的PPARγ2及C/EBPα表达水平下调均具有显著差异(p<0.05),且具有浓度依赖性。结论杜仲叶提取物及其化合物槲皮素、(+)-丁香脂素均具有抑制BMSCs成脂分化的作用,且具有浓度依赖性,其机制与PPARγ2及C/EBPαmRNA表达水平的下调有关。
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